伊氏李斯特菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 伊氏李斯特菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Listeria ivanovii Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3602 |
预期用途
本试剂盒用于快速、特异性地检测样品中伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)的核酸含量，适用于食品、环境样品及临床样本中伊氏李斯特菌的定性或定量检测。
检测原理
本试剂盒采用SYBR Green荧光染料法实时定量PCR技术，靶向伊氏李斯特菌特异性基因序列设计引物。PCR扩增过程中，SYBR Green染料与双链DNA结合发出荧光信号，荧光强度与PCR产物量成正比，通过实时监测荧光信号实现对起始模板的定量分析。
试剂盒组成
主要组分
2× SYBR Green qPCR预混液（含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺等）
伊氏李斯特菌特异性引物混合液（冻干粉或液体）
阳性对照（伊氏李斯特菌DNA）
阴性对照（无核酸水）
ROX参比染料（部分机型需要）
可选组分
DNA提取试剂
无核酸酶水
PCR反应管或板
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期通常为12个月。
适用仪器
适用于ABI 7500、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler、Thermo QuantStudio等主流实时荧光定量PCR仪。
样本要求
样本类型：食品样品、环境拭子、临床样本等
DNA提取：建议使用商业化的细菌DNA提取试剂盒
DNA浓度：建议10-100ng/μL
样本体积：每反应2-5μL DNA模板
检测方法
实验前准备
试剂解冻后充分混匀，短暂离心
根据反应数计算所需试剂体积
在冰上配制反应体系
反应体系配制（以20μL体系为例）
| 组分 | 体积(μL) |
| 2× SYBR Green预混液 | 10 |
| 特异性引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2-5 |
| 无核酸酶水 | 补至20 |
PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 采集荧光 |
| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 | 否 |
| 变性 | 95℃ | 15sec | 40 | 否 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30sec | 40 | 是 |
| 熔解曲线分析 | 60-95℃ | 按仪器要求 | - | 是 |
结果分析
阈值设定：通常取指数扩增期的荧光信号
阳性判断：Ct值≤35且有典型扩增曲线
阴性判断：无扩增曲线或Ct值>35
熔解曲线分析：确认产物特异性
性能参数
灵敏度：可检测10拷贝/反应的伊氏李斯特菌DNA
特异性：不与单核细胞增生李斯特菌等其他李斯特菌种交叉反应
线性范围：10¹-10⁸拷贝/反应
重复性：CV<5%
注意事项
实验操作应在无菌环境下进行，避免污染
试剂解冻后应避免反复冻融
建议设置阳性对照、阴性对照和空白对照
熔解曲线分析是必须步骤，用于确认扩增特异性
不同仪器可能需要调整ROX参比染料的用量
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