产品介绍:

产品名称 | 小鼠非组织特异性碱性磷酸酶(ALPL)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Mouse ALPL ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A115609 |
实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法。预先包被ALPL捕获抗体的微孔板依次加入标准品和待测样本,样本中的ALPL与固相抗体结合。随后加入生物素标记的检测抗体,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,催化底物TMB显色,颜色深浅与ALPL浓度正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本中的ALPL浓度。

试剂盒组成

预包被抗体的酶标板:用于固相抗体的固定。
标准品:已知浓度的ALPL溶液,用于绘制标准曲线。
生物素标记的检测抗体:与ALPL结合。
HRP标记的链霉亲和素:催化显色反应。
显色底物(TMB):在HRP作用下显色。
终止液:终止显色反应。
洗涤液:用于洗涤未结合的试剂。
样本稀释液:用于稀释待测样本。
检测范围与灵敏度
检测范围:通常为0.156-10ng/mL或15.63-1000pg/mL。
灵敏度:最低检测浓度为12.8pg/mL或9.38pg/mL。
操作步骤

准备试剂和样本:按说明书准备试剂,处理样本。
加样:将标准品和样本加入酶标板孔中。
温育:在指定温度下孵育,使抗体-抗原充分结合。
洗涤:洗去未结合的试剂,减少背景干扰。
加酶标抗体:加入生物素标记的检测抗体和HRP标记的链霉亲和素。
显色:加入TMB底物,避光孵育显色。
终止反应:加入终止液,终止显色。
读数:使用酶标仪在450nm波长下测定OD值。
计算:根据标准曲线计算样本中的ALPL浓度。
注意事项

样本处理:血清、血浆需离心处理,避免反复冻融。
试剂保存:试剂盒需按说明书保存,避免失效。
操作规范:使用一次性吸头,避免交叉污染;严格按步骤操作,确保结果准确性。
适用范围
本试剂盒适用于科研领域,用于检测小鼠血清、血浆、细胞培养上清液及相关生物液体中的ALPL浓度,不适用于临床诊断。
试剂与样本准备阶段:

温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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关键字: 小鼠非组织特异性碱性磷酸酶 ;ALPL;ELISA试剂盒;
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