球孢白僵菌染料法荧光定量PCR试剂盒

球孢白僵菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于检测球孢白僵菌（Beauveria bassiana）的核酸，适用于科研用途，不可用于临床诊断。试剂盒包含优化引物、荧光染料、阳性对照及反应体系所需组分，具有高灵敏度和特异性，支持定性与定量分析。

产品组成

PCR反应液：预混含荧光染料（激发波长471 nm，发射波长530 nm）、dNTPs、Mg²⁺及稳定剂。

引物混合液：针对球孢白僵菌高度保守区域设计，避免非特异性扩增。

阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）：用于标准曲线绘制及实验质控。

超纯水：无核酸酶污染，用于体系稀释。

规格：50次/盒（20 μL反应体系）。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

保质期：未开封状态下12个月。

实验操作

1. 样本准备

提供待测DNA模板（建议浓度10–100 ng/μL），避免RNA或蛋白污染。

2. PCR体系配置

按以下比例配制反应体系（单次20 μL）：

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR反应液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 超纯水 | 6 |

阴性对照：以水替代模板DNA；阳性对照：使用试剂盒提供标准品。

3. 扩增程序

推荐循环参数（需根据仪器调整）：

| 步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95 | 3 min | 1 |

| 变性 | 95 | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60 | 30 sec | |

| 信号采集 | 60 | 30 sec | |

注：信号采集设置在退火/延伸阶段，荧光通道匹配染料特性（如FAM/SYBR Green）。

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

灰区（35<Ct<40）：需重复检测，若Ct仍<40判为阳性。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。

若用于绝对定量，建议使用梯度稀释标准品（10²–10⁶拷贝/μL）。

公司正在出售的产品