猪布鲁氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪布鲁氏杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Brucella suis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3637 |
检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对猪布鲁氏杆菌基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量分析。扩增过程中，荧光信号强度与目标核酸含量成正比，通过标准曲线计算样本中猪布鲁氏杆菌的拷贝数。
试剂组成
扩增预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料（500μL/管，避光保存）。
特异性引物混合液：猪布鲁氏杆菌靶基因引物（100μL/管）。
阳性对照：1×10^8 拷贝/μL的猪布鲁氏杆菌DNA片段（50μL/管）。
模板稀释液：无核酸酶水（1mL/管，用于标准曲线制备）。
使用手册：含操作流程及数据分析方法。
性能特点
高特异性：引物针对猪布鲁氏杆菌保守序列设计，与其他病原体无交叉反应。
高灵敏度：最低检测限可达100拷贝/反应。
闭管操作：减少气溶胶污染风险。
即用型：预混反应液简化操作步骤，仅需加入模板DNA。
适用范围
科研用途：适用于猪布鲁氏杆菌核酸的实验室检测，不可用于临床诊断。
储存与运输
储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输方式：低温干冰运输。
自备试剂与仪器
仪器：支持SYBR Green通道的实时荧光定量PCR仪。
耗材：PCR管、离心管、带滤芯枪头等。
操作步骤
样本处理：提取待测样本DNA（建议浓度≥10ng/μL）。
阳性对照稀释：按10倍梯度稀释阳性对照（10^2–10^7 拷贝/μL），用于标准曲线绘制。
反应体系配制（20μL/反应）：
预混液10μL + 引物混合液2μL + 模板DNA2μL + 超纯水6μL。
PCR程序设置：
预变性：95℃ 5分钟；
扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）。
数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本中目标核酸含量。
注意事项
实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。
阳性对照需独立稀释，严禁直接使用高浓度原液。
反应液避光保存，避免反复冻融。
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