牛纽布病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛纽布病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Bovine Nebovirus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3648 |
产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测牛纽布病毒核酸，具有高灵敏度、高特异性和操作简便等特点。试剂盒包含所有必要的反应组分，用户只需提供待测样品即可进行检测。
检测原理
本试剂盒基于荧光定量PCR技术，利用特异性引物扩增牛纽布病毒靶序列，同时通过荧光染料实时监测扩增产物。荧光信号强度与PCR产物量成正比，通过标准曲线可实现病毒核酸的定量分析。
试剂盒组成
反应预混液（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）
荧光染料
引物混合液
标准品（5个浓度梯度）
阳性对照
阴性对照
样品稀释液
DNA释放液（溶液A和溶液B）
自备仪器和耗材
仪器：分析天平、离心机、荧光PCR扩增仪、组织研磨器、-20℃冰箱
可调移液器（2μL、20μL、200μL、1000μL）
耗材：荧光PCR反应管、灭菌离心管、吸头（10μL、200μL、1000μL）
样品制备
在标记好的离心管中加入1-5mg固体样品或5μL液体样品
加入100μL溶液A工作液，确保样品完全浸没
95℃保温10分钟
冷却至室温后加入10μL溶液B，混匀得DNA释放液
标准品稀释
本试剂盒提供原倍标准品，建议按以下梯度稀释：
24μg/ml（5号标准品）：150μl原倍标准品加150μl稀释液
12μg/ml（4号标准品）：150μl 5号标准品加150μl稀释液
6μg/ml（3号标准品）：150μl 4号标准品加150μl稀释液
3μg/ml（2号标准品）：150μl 3号标准品加150μl稀释液
1.5μg/ml（1号标准品）：150μl 2号标准品加150μl稀释液
PCR反应体系配置（40μL体系）
在PCR管中加入以下成分：
反应预混液：20μL
引物混合液：5μL
荧光染料：2μL
模板DNA：10μL（建议设置两个不同浓度）
灭菌水：补足至40μL
反应程序
逆转录：50℃ 30分钟
预变性：95℃ 10分钟
扩增循环（40个循环）：
变性：95℃ 15秒
退火/延伸：60℃ 60秒（采集荧光信号）
结果分析
根据标准曲线计算样品中病毒核酸含量
阳性对照应出现典型扩增曲线，阴性对照无扩增
样品Ct值≤35且扩增曲线典型判为阳性
注意事项
实验前请仔细阅读说明书
所有试剂使用前应充分混匀并短暂离心
避免反复冻融试剂
操作过程中注意防止交叉污染
建议在专业实验室由经过培训的人员操作
储存条件
-20℃避光保存，有效期12个月。避免反复冻融，解冻后请于4℃保存并在1周内使用完毕。
预期性能
检测灵敏度：≥10拷贝/反应
特异性：与牛常见病原体无交叉反应
批内变异系数：≤5%
批间变异系数：≤10%
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