产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，用于特异性检测龟分枝杆菌基因组DNA。试剂盒包含针对龟分枝杆菌高度保守区域设计的引物和探针，通过实时监测荧光信号实现定性分析，具有高灵敏度和特异性。
产品名称 | 龟分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Mycobacterium chelonae Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3537 |
产品特点
即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，操作简便。
高灵敏度：优化后的引物和探针可检测低拷贝数目标序列。
内控设计：提供阳性对照，有效区分假阴性结果。
特异性强：引物经严格筛选，避免与其他生物DNA发生交叉反应。
储存条件与有效期
储存温度：-20℃避光保存。
有效期：12个月（生产日期见包装标签）。
实验前准备
设备与耗材
荧光定量PCR仪
移液器及无菌带芯枪头
离心机、冰盒、RNase-free离心管及八连排管
试剂解冻与混匀
从-20℃取出试剂，置于冰上缓慢解冻（5-10分钟）。
解冻后轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡或涡旋。
短暂离心（1000 rpm，5-10秒）收集管壁液体。
操作步骤
DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，建议在样本制备区完成。
标准曲线制备（阳性对照稀释）
标记6管（7-2号），每管加45 μL DEPC-H₂O。
7号管加入5 μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL标准品。
依次梯度稀释至2号管（1×10²拷贝/μL），每次更换枪头，冰上保存。
PCR反应体系配置
反应体系（以96孔板为例）：
模板DNA：2 μL
预混液（含染料、酶、dNTPs）：10 μL
引物探针混合液：1 μL
无菌超纯水：补足至20 μL
技术重复：建议每样本设3复孔，并设置阴性对照（NTC）。
上机检测
按仪器说明书设置程序：
预变性：95℃ 2分钟
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）
分析阈值循环数（Ct值），判定结果。
结果判读
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型。
阴性：无Ct值或Ct值＞35，需结合阴性对照确认。
注意事项
实验分区操作，避免交叉污染。
试剂解冻后避免反复冻融。
本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。
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