产品用途
科研用途，适用于定性或定量检测丙酸杆菌属（Propionibacterium spp.）的DNA。
产品名称 | 丙酸杆菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Propionibacterium spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3551 |
产品特点
即开即用：预混优化引物、染料及反应缓冲液，用户仅需提供DNA模板。
高灵敏度与特异性：引物针对保守区域设计，避免交叉反应，检测限低至10^2拷贝/μL。
双功能检测：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^2–10^7拷贝/μL）。
质量控制：提供阳性对照（非活体DNA片段），便于区分假阴性结果。
防污染设计：建议使用带滤芯枪头，分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区）。
操作步骤
阳性对照稀释（以10^2–10^7拷贝/μL为例）
标记6管，分别加入45μL荧光PCR专用稀释液。
梯度稀释：取5μL 10^8拷贝/μL阳性对照至第一管（10^7拷贝/μL），依次稀释至10^2拷贝/μL，每步更换枪头并涡旋混匀。
稀释后置于冰上备用。
样本DNA提取
建议使用商业化DNA提取试剂盒，确保无核酶污染。
PCR反应体系配制
按20μL体系混合：模板DNA 2μL、预混PCR试剂18μL（含染料、引物、dNTPs等）。
阴性对照：以无核酸水替代模板；阳性对照使用稀释后的标准品。
荧光定量PCR程序
预变性：95℃ 5分钟。
扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
熔解曲线分析（可选）：60–95℃逐步升温，验证产物特异性。
注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、PCR扩增需在独立区域完成，避免交叉污染。
低温操作：样本处理需在0–4℃下进行，防止DNA降解。
质控要求：每批实验必须包含阴/阳性对照。
仪器校准：定期校准荧光定量PCR仪，确保数据准确性。
结果判读
定性检测：Ct值≤35且熔解曲线单一峰为阳性。
定量检测：根据标准曲线计算模板拷贝数。
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