产品概述
本试剂盒采用荧光定量RT-PCR技术，专用于牛鼻炎病毒（Bovine Rhinitis Virus, BRV）核酸的快速、高灵敏度检测。通过特异性引物和探针结合染料法荧光信号放大系统，可实现病毒RNA的准确定量分析，适用于临床样本、环境监测及科研用途。
产品名称 | 牛鼻炎病毒通用 染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Bovine Rhinovirus Universal Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3554 |
检测原理
RNA提取与逆转录：样本中的病毒RNA经裂解释放后，通过逆转录酶合成cDNA。
荧光定量PCR：采用特异性引物和荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合，实时监测扩增荧光信号，通过标准曲线计算病毒载量。
试剂盒组成
反应预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。
标准品：梯度稀释的阳性标准品（浓度范围1.5–24 μg/mL），用于建立定量曲线。
阴性/阳性对照：确保检测体系有效性。
RNA提取试剂：溶液A（裂解液）、溶液B（中和液）。
操作步骤
1. 样本制备
固体样本：取1–5 mg组织，加入100 μL溶液A，95℃裂解10分钟，冷却后加入10 μL溶液B混匀。
液体样本：取5 μL直接加入裂解液，震荡混匀。
2. RT-PCR反应体系（40 μL）
| 成分 | 体积（μL） |
| 预混液 | 20 |
| 引物探针混合液| 5 |
| 模板cDNA | 5 |
| RNase-free水 | 10 |
3. 扩增程序
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 3分钟
循环扩增（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）
结果判读
阈值设定：以扩增曲线指数期荧光信号超过背景阈值为阳性。
定量分析：根据标准品Ct值生成标准曲线，计算样本病毒载量。
注意事项
实验需在无菌环境下操作，避免RNA降解。
建议每个样本设置复孔，模板用量差异10倍以验证重复性。
扩增结束后立即分析数据，避免荧光信号衰减。
性能参数
灵敏度：最低检测限为10 copies/μL。
特异性：与牛赤羽病病毒等常见病原体无交叉反应。
稳定性：试剂盒-20℃保存有效期12个月。
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