产品名称 | 刚果锥虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Trypanosoma congolense Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3573 |
产品特点
高特异性：引物针对刚果锥虫保守基因序列（如ITS区或18S rRNA）设计，与其他锥虫或宿主DNA无交叉反应。
即开即用：预混液含DNA聚合酶、dNTPs、引物及荧光染料（SYBR Green），用户仅需提供DNA模板。
高灵敏度：可检测低至10²拷贝/μL的病原DNA，适用于早期感染筛查。
防污染设计：一管式闭管检测，避免扩增产物污染。
内置对照系统：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）和阴性对照（超纯水），确保实验有效性。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 保存条件 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（含染料）| -20℃避光 |
| 刚果锥虫引物混合物 | 100μL | -20℃ |
| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL）| -20℃单独存放 |
| 阴性对照（超纯水） | 1 mL | -20℃ |
| 荧光PCR专用稀释液 | 1 mL | -20℃ |
实验操作流程
1. 样本处理
使用商业化核酸提取试剂盒提取样本DNA（如血液或组织）。
阳性对照：取10μL阳性对照用稀释液按比例稀释。
阴性对照：直接使用超纯水。
2. 反应体系配制（20μL/管）
| 组分 | 体积（μL） ||
| 2×qPCR MagicMix | 10 |
| 引物混合物 | 2 |
| DNA模板/对照 | 5 |
| 超纯水 | 3 |
3. PCR扩增程序（荧光定量仪）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 30-35 |
| 退火/延伸 | 55-57℃ | 40 sec | |
| 荧光信号采集 | 退火阶段（FAM通道） |
结果分析
阈值设定：以阴性对照最高荧光值为基线。
判定标准：
阳性：Ct值≤38，扩增曲线呈典型S型。
可疑：38 < Ct值 <40，建议复检。
阴性：无Ct值或Ct值≥40。
注意事项
分区操作：严格区分试剂准备区、样本处理区和扩增区，避免交叉污染。
质量控制：每批次实验需包含阳性和阴性对照。
试剂解冻：使用前需完全解冻并混匀，6000 rpm离心10秒。
有效期：12个月（-20℃保存）。
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