熊峡谷病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称
英文名称
Bear Canyon Virus (BCNV) Dye-based qRT-PCR Kit
规格
50T
货号
PR3835
试剂盒组成
2×qPCR Magic Mix：500 μL（棕色管，含SYBR Green荧光染料）
荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（黄盖）
病毒染料法qPCR引物混合液：100 μL（白盖，特异性靶向BCNV基因序列）
性能特点
高特异性：引物基于熊峡谷病毒保守区设计，避免交叉反应。
高灵敏度：荧光定量检测，较传统PCR灵敏度提升10-100倍。
便捷性：即开即用，仅需提供DNA模板；闭管操作降低污染风险。
稳定性：预混优化反应体系，减少批次差异。
实验步骤
样本处理：按标准方法提取病毒RNA并逆转录为cDNA。
反应体系配制（20μL/反应）：
2×qPCR Magic Mix：10 μL
引物混合液：2 μL
cDNA模板：2 μL
稀释液补足至20 μL。
PCR程序（需根据仪器优化）：
预变性：92℃ 5分钟
循环阶段（30次）：
变性：92℃ 60秒
退火：54℃ 60秒
延伸：72℃ 60秒（信号采集建议设于此步骤）
数据分析：
定量检测：通过标准曲线计算样本浓度（Ct值-log浓度线性关系）。
定性检测：
阳性判定：Ct≤35；阴性判定：Ct≥40；
灰区（35<Ct<40）需复测，复测Ct<40判阳性。
注意事项
实验需在无核酸污染环境下操作，建议使用UDG酶防污染。
阴性对照Ct≥40且阳性对照Ct≤30为实验有效性标准。
荧光染料避光保存，避免反复冻融。
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