产品介绍:

大鼠饥饿素(GHRL)ELISA试剂盒是一种用于定量测定大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清液等样本中饥饿素(Ghrelin/GHRL)浓度的科研工具,广泛应用于内分泌、代谢、肥胖、糖尿病及胃肠疾病等领域的研究。
产品名称 | 大鼠饥饿素(GHRL)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Rat GHRL ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A109161 |

检测原理

试剂盒主要采用竞争ELISA法或双抗体夹心法ELISA原理:
竞争法:预先包被饥饿素抗原,实验时样本中的饥饿素与包被抗原竞争结合生物素标记的抗饥饿素抗体,经孵育和洗涤后,加入酶标亲和素,形成免疫复合物,最后加入显色底物,颜色深浅与饥饿素浓度负相关。
双抗体夹心法:用抗饥饿素抗体包被酶标板,样本中的饥饿素与抗体结合,再加入生物素标记的检测抗体和HRP-亲和素,形成复合物,显色后颜色深浅与饥饿素浓度正相关。
主要参数

检测范围:不同品牌为0.156-10 ng/mL或.46-10000 pg/mL
灵敏度:最低检测限可达0.042-0.1 ng/mL
样本类型:血清、血浆(EDTA/肝素)、组织匀浆、细胞上清等
特异性:仅针对饥饿素(GHRL),与类似物无显著交叉反应
精密度:批内和批间变异系数通常<10%
保存条件:2-8℃冷藏保存,避免反复冻融,有效期6个月至1年
操作步骤(简要)

试剂盒及样本平衡至室温,洗涤液提前稀释
设置标准品孔和样本孔,分别加入标准品和待测样本
37℃孵育30-60分钟,抗原抗体充分结合
洗涤酶标板,去除未结合物质
加入酶标检测抗体,37℃继续孵育30-60分钟
洗涤后加显色液,避光反应10-15分钟
加终止液,酶标仪450 nm读数,绘制标准曲线并计算浓度
注意事项

样本避免反复冻融,血浆推荐使用EDTA或肝素抗凝
试剂盒仅供科研使用,不用于临床诊断
不同批号试剂不可混用,加样前需摇匀
洗涤过程需充分,避免交叉污染和板内干燥
显色底物TMB需避光保存,现配现用
试剂与样本准备阶段

温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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ELISA试剂盒的主要优点
ELISA之所以被广泛应用,主要归功于以下几个核心优势:
灵敏度高(抓得准):
它利用酶的催化放大作用,能将微弱的信号放大,因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质(甚至达到皮克级 pg/mL)。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质,它也能“捕捉”到。
特异性强(瞄得准):
基于抗原-抗体的特异性结合原理,试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应,很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率,结果准确可靠。
操作简便且快速:
相比于一些复杂的仪器分析方法,ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件,按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。
高通量与适用性广:
它通常采用96孔板或48孔板,一次实验可以同时处理几十个样本,非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外,它不仅能测蛋白,还能测抗体、激素、药物残留甚至农药,应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。
安全稳定:
不像放射免疫法那样使用放射性同位素,ELISA使用的是酶标记,对人体和环境无辐射危害,且试剂保存时间较长。
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