产品介绍:

大鼠肌酸激酶MB同工酶(CKMB)ELISA试剂盒是一种用于定量检测大鼠血清、血浆及其他生物液体中CK-MB浓度的科研工具,采用双抗体夹心ELISA法,
具有高灵敏度和特异性。
产品名称 | 大鼠肌酸激酶MB同工酶(CKMB)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Rat CKMB ELISA |
规格 | 48T/96T | 货号 | A109143 |

核心原理

试剂盒基于双抗体夹心法,预先将抗CK-MB抗体包被在酶标板上,加入标准品或待测样品后,再加入生物素标记的检测抗体和HRP-链霉亲和素,
形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”复合物,最后加入TMB显色底物,通过酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),
利用标准曲线计算样品中CK-MB的浓度。
关键性能参数

项目 参数
检测范围 1.56 ng/mL ~ 100 ng/mL(不同品牌略有差异)
灵敏度 最低可检测1.0 U/mL或0.78 ng/mL
特异性 仅识别大鼠CK-MB,无明显交叉反应
样本类型 血清、血浆、细胞上清、组织匀浆等
保存条件 2-8℃冷藏保存,避免反复冻融
有效期 通常为6个月至1年
操作要点

试剂准备:所有试剂使用前需平衡至室温(20-25℃),洗涤液若有结晶需加热溶解。
标准品稀释:建议做7个浓度梯度,用于绘制标准曲线。
加样与孵育:加样时避免气泡,孵育时避免强光照射。
洗涤:使用洗涤液充分清洗,避免非特异性吸附。
显色与终止:加入TMB底物后避光反应,颜色由蓝变黄后加入终止液。
试剂与样本准备阶段

温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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ELISA试剂盒的主要优点
ELISA之所以被广泛应用,主要归功于以下几个核心优势:
灵敏度高(抓得准):
它利用酶的催化放大作用,能将微弱的信号放大,因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质(甚至达到皮克级 pg/mL)。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质,它也能“捕捉”到。
特异性强(瞄得准):
基于抗原-抗体的特异性结合原理,试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应,很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率,结果准确可靠。
操作简便且快速:
相比于一些复杂的仪器分析方法,ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件,按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。
高通量与适用性广:
它通常采用96孔板或48孔板,一次实验可以同时处理几十个样本,非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外,它不仅能测蛋白,还能测抗体、激素、药物残留甚至农药,应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。
安全稳定:
不像放射免疫法那样使用放射性同位素,ELISA使用的是酶标记,对人体和环境无辐射危害,且试剂保存时间较长。
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