预期用途
本试剂盒用于定性或定量检测鱼类（如石斑鱼、鲈鱼等）组织、水体或卵中 病毒性神经坏死病病毒（VNNV） 的RNA，适用于疫病监测、养殖场防控及科研用途。
产品名称 | 病毒性神经坏死病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Viral Nervous Necrosis Virus (VNNV) Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3744 |
检测原理
RNA提取：样本中提取病毒RNA。
反转录（RT）：将RNA逆转录为cDNA。
荧光定量PCR：采用 SYBR Green染料法，通过特异性引物扩增VNNV靶基因（如RNA依赖性RNA聚合酶基因），实时监测荧光信号，定量病毒载量。
主要组分
| 组分名称 | 规格 | 数量 |
| RT-PCR预混液（含SYBR Green） | 1 mL/管 | 1管 |
| VNNV特异性引物混合液 | 100 μM | 1管 |
| 阳性对照（VNNV RNA） | 1×10^5 copies/μL | 1管 |
| 阴性对照（DEPC水） | 1 mL | 1管 |
| RNase-Free水 | 1 mL | 1管 |
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。
预混液解冻后需冰上操作，建议分装使用。
操作步骤
1. 样本前处理
取鱼类脑、眼或卵巢组织（50-100 mg），匀浆后使用RNA提取试剂盒（需另购）提取总RNA。
2. 反转录（RT）
按说明书将RNA模板、引物和RT酶混合，42℃反应15分钟。
3. 荧光定量PCR
反应体系（20 μL）：
预混液：10 μL
引物混合液：2 μL
cDNA模板：2 μL
RNase-Free水：6 μL
反应程序：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 扩增 | 95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec | 40 |
| 熔解曲线分析 | 60℃→95℃（每0.5℃升1 sec） | 1 |
结果判读
阳性：Ct值≤35，且熔解曲线为单一峰值（Tm值符合说明书范围）。
阴性：无Ct值或Ct值>40。
临界值：35<Ct≤40，建议重复检测。
注意事项
实验需在 生物安全二级实验室 进行，避免气溶胶污染。
试剂开封后尽快使用，避免反复冻融。
不同仪器需优化反应条件，建议设置 三复孔。
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