猪瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于猪瘟病毒（Hog Cholera Virus, HCV）的定性与定量检测。适用于科研用途，检测灵敏度高，特异性强，可有效区分病毒基因组，避免与其他微生物的交叉反应。

组成与保存

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

规格：50次/盒（20μL反应体系）。

荧光染料特性：

游离状态吸收峰：471 nm；结合DNA后吸收峰：500 nm，发射峰：530 nm。

信号采集建议在复性或延伸步骤进行。

检测原理

通过特异性引物扩增猪瘟病毒保守基因序列，荧光染料与双链DNA结合后释放信号，实时监测扩增曲线，计算Ct值。定量检测时需绘制标准曲线（线性范围≥5个数量级），定性检测依据Ct值判读结果。

操作步骤

样本处理：

使用推荐方法提取病毒RNA，避免交叉污染。

阳性对照为无传染性DNA片段，需独立稀释（10^2~10^7拷贝/μL梯度）。

反应体系配制：

按说明书融化试剂，混匀后离心。

每反应孔加入模板RNA、引物、探针及预混液，总体系20μL。

PCR程序：

逆转录：50℃ 15分钟；预变性：95℃ 2分钟；扩增：95℃ 15秒→60℃ 1分钟（40循环）。

数据分析：

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，推算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35；可疑（35<Ct<40）需复测。

阳性对照Ct≤30，阴性对照Ct≥40。

注意事项

生物安全：实验分区操作（样本处理、试剂配制、加样），使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

质量控制：

避免试剂冻融或运输不当导致效能下降。

基因变异或提取效率差异可能导致假阴性，建议结合其他检测方法验证。

局限性：本结果仅供科研参考，临床诊断需综合症状及其他检测。

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