重组蛋白生产流程:
通常包括以下几个核心步骤:
基因克隆:首先,科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列(目的基因)。
构建载体:将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中,这个载体就像是一个运输工具,
能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。
转入宿主:将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中,这个过程称为“转化”或“转染”。
表达与培养:宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养,其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息,开始大量生产目标蛋白。
纯化:通过一系列复杂的生物化学方法(如层析技术),将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来,以获得高纯度的产品。
产品概述:
重组人GAPDH蛋白(Recombinant Human Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase)是一种通过基因工程技术在体外表达和纯化的关键代谢酶。作为糖酵解途径的核心酶,GAPDH不仅是细胞能量代谢的“主力军”,更因其在细胞核内的多种非代谢功能(如DNA修复、细胞凋亡调控)而被称为“兼职蛋白”(Moonlighting Protein)。该重组蛋白是研究代谢疾病、神经退行性疾病及药物筛选的重要工具。
产品名称; Recombinant Human GAPDH
别名; aging-associated gene 9 protein, EC 1.2.1, EC 1.2.1.12, EC 2.6.99.-, G3PD, G3PDH, GAPDH, GAPDPeptidyl-cysteine S-nitrosylase GAPDH, glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, MGC88685
宿主; E.Coli
表达区间; 2-335
分子量; 35.9 KDa
标签; N-terminal His Tag
纯度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
操作要点:
电泳条件:使用15% SDS-PAGE凝胶,以提高对小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
转膜参数:采用湿转法,100 V、60–90分钟(4°C),使用PVDF膜(需甲醇预活化)。
抗体选择:
一抗:抗CST3多克隆抗体(如兔源抗体),推荐稀释比为1:1000。
二抗:HRP标记的山羊抗兔IgG,稀释比1:10,000。
显色方式:ECL化学发光法,预期条带位于~13.4 kDa处。
内参建议:由于CST3分子量较小,可选用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作为内参,避免条带重叠。
注意事项:
安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜,遵循实验室生物安全规范。
安全提示:仅限研究使用,避免接触临床样本;操作时需佩戴防护装备。
质量控制:产品纯度通过SDS-PAGE验证,确保生物活性稳定;避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。
兼容性:适用于多种实验体系,但需优化浓度以避免非特异性结合。
公司正在出售的产品:
突触样蛋白5亚型2 | 通用型HHV6-B(HUMAN HERPESVIRUS 6-B)病毒 |
跨膜蛋白120A | GMS10甲基化基因电转感受态细菌 |
糖果阿斯巴塘(aspartame)含量高效液相色谱法定量pcr检测试剂盒 | 载玻片细胞CASPASE-6蛋白表达NBT显色光学显微镜酶联免疫试剂盒 |
组织CDK2/CYCLIN E激酶活性定量pcr检测试剂盒(A/B/C) | 细胞酶(glutaminase)活性比色法(405)定量酶联免疫试剂盒 |
动物源性饲料羊源基因pcr检测试剂盒 | TIGIT抗体 |
富含亮氨酸蛋白LRP130 | G蛋白γ 1/Gγ 1 抗体 |
载玻片细胞BAX蛋白表达荧光显微镜pcr检测试剂盒 | 细胞磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCase)活性 |
植物N-糖基糖蛋白树脂法纯化试剂盒 | 体液氧化应激活性氧(ROS)荧光测定试剂盒(过氧亚硝基阴离子) |
中胚层诱导早期反应蛋白2 | FATE1蛋白抗体 |
活化T细胞核因子1蛋白 | 脑特异性跨膜蛋白抗体 |
p21激活激酶1 | 蛋白激酶C theta抗体 |
通用型糖类总量铁氰化物比色法定量pcr检测试剂盒 | Recombinant Human GAPDH载脂蛋白C3抗体 |
脑型肌酸激酶B型抗体 | ACN9蛋白抗体 |
关键字: GAPDH;35.9 KDa; 2-335;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物专注于实验室和公共卫生领域,利用互联网、数据分析及自动化技术,包括实验室固定资产、仪器设备、生物样本、化学品、试剂、配件耗材、环境、仪器自动化和高通量筛选等一体化综合管理平台。不断为各行业实验室细胞生命学产品、技术服务、免疫学和分子学产品,截止至2024年5月,西格生物已为生命科学、检验检测、化工材料、科研院所、政府机构多行业300余家知名客户提供实验室完整解决方案。本着帮助用户实现“让科研场所更智能、让科研人员更专注、让科学服务更高效“的愿景,西格生物将继续在实验室科研产品领域持续发力,更加重视本土化,建构通用性高、适应性好、模块搭配灵活,能快速响应客户需求的产品。