产品介绍：
该试剂盒主要用于罗非鱼养殖业，针对罗湖病毒（Tilapia Lake Virus, TiLV）进行高灵敏度、高特异性的检测，帮助养殖户和检测机构预警“罗非鱼夏末死亡综合征”。
该试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术（qRT-PCR），能够实现病毒的早期诊断和精准定量。
产品名称 | 罗湖病毒（TiLV）RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法） | 货号 | AP3572 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 48T |
�� 产品核心信息
检测对象：罗湖病毒（TiLV）RNA。
检测原理：一步法RT-qPCR（TaqMan荧光探针法）。针对TiLV基因组的保守区域（如Segment 1或衣壳蛋白基因）设计特异性引物和探针。
荧光通道：FAM（检测TiLV靶基因）。部分试剂盒可能包含内参基因（如罗非鱼β-actin）检测通道（如VIC/HEX）。
适用仪器：ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等实时荧光定量PCR仪。
检测样本：罗非鱼的脑组织、脾脏、肾脏、鳃或体液匀浆液。
�� 试剂盒组成（以48T为例）
组分名称 规格 作用说明
2×qRT-PCR Mix 500 μL x 1管 含dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq酶、逆转录酶、缓冲液
TiLV Primers & Probe 100 μL x 1管 含TiLV特异性引物和FAM标记的探针
阳性对照 (PC) 50 μL x 1管 含TiLV目标基因片段的质粒或体外转录RNA
阴性对照 (NC) 250 μL x 1管 无RNA酶水（RNase-free Water）
�� 操作流程详解
1. 样本处理与RNA提取
组织样本：取罗非鱼脑、脾脏或肾脏组织约20-50 mg，加入500 μL生理盐水或裂解液，使用组织研磨器制备匀浆。
RNA提取：
取200 μL匀浆液，使用病毒RNA提取试剂盒（如离心柱法或磁珠法）进行提取。
洗脱步骤：加入50-100 μL洗脱缓冲液洗脱RNA。
关键点：操作全程需在冰上或4℃环境下进行，防止RNA降解。使用无RNA酶的耗材。
2. 反应体系配制（冰上操作）
总体系：20 μL。
配制表：
试剂 体积
2×qRT-PCR Mix 10 μL
TiLV Primers & Probe 1 μL
模板RNA 2-5 μL
RNase-free Water 补足至20 μL
�� 结果判读标准
1. 质控标准
阴性对照 (NC)：FAM通道无扩增曲线（Ct值未定义或≥40）。
阳性对照 (PC)：FAM通道必须出现典型的"S"型扩增曲线，且Ct值 ≤ 30。
2. 样本判定
阳性 (+)：FAM通道出现明显的"S"型扩增曲线，且 Ct值 ≤ 35。表明样本中含有TiLV病毒。
可疑 (±)：Ct值在 35-40 之间。建议对该样本进行复检，若复测Ct值 < 35则判为阳性。
阴性 (-)：FAM通道无扩增曲线，或Ct值 ≥ 40。
⚠️ 注意事项
防污染：必须严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区）。阳性对照应单独存放，避免气溶胶污染导致假阳性。
RNA酶防护：TiLV是RNA病毒，极易降解。操作时必须佩戴口罩、手套，使用无RNA酶的耗材。
生物安全：阳性对照含有病毒基因片段，操作时应视为具有潜在传染性，需在生物安全柜内操作。
临床意义：检测结果需结合罗非鱼的临床症状（如眼球突出、体色发黑、腹部肿胀、溃烂等）进行综合判断。
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注意事项
防污染操作
需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。
阳性对照管理
浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。
局限性
仅限科研使用，不可用于临床诊断；
环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。
关键字： 罗湖病毒;TiLVRNA ;核酸检测试剂盒;PCR-荧光探针法SB标准;
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