对虾白斑综合症病毒（WSSV）/对虾传染性皮下及造血组织坏死症病毒（IHHNV）双重核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

产品介绍：

该试剂盒主要用于对虾养殖业中两种重大病毒病的同步检测，能够显著提高检测效率、降低检测成本。

 �� 产品核心信息

检测对象：

对虾白斑综合症病毒（WSSV）：引起白斑病，发病急、死亡率高。

对虾传染性皮下及造血组织坏死症病毒（IHHNV）：引起矮小畸形综合征（Runt-Deformity Syndrome, RDS），影响生长并导致畸形。

检测原理：双重实时荧光定量PCR（Duplex qPCR），采用TaqMan荧光探针技术。试剂盒在同一反应管中同时加入两对特异性引物和两条不同荧光标记（如FAM和VIC/HEX）的探针，分别靶向WSSV的保守基因（如VP28）和IHHNV的保守基因（如NS1或非编码区）。

技术优势：

高特异性：探针与靶序列特异性结合，避免交叉反应。

高效率：一次反应同时检测两种病毒，节省时间和样本。

灵敏度：最低检测限通常可达 1×10³ copies/mL。

适用样本：对虾的肝胰腺、鳃、血淋巴组织，或水体环境样本。

�� 产品组成与规格

组分名称  规格示例  说明

2×qPCR反应预混液  800 μL (管)  预混了dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等核心成分。

WSSV/IHHNV引物探针混合液  100 μL (管)  含两对引物及两条不同标记的探针（FAM检测WSSV，VIC/HEX检测IHHNV）。

酶混合物 (Enzyme Mix)  100 μL (管)  含热启动Taq DNA聚合酶，需-20℃保存。

阳性对照 (Positive Control)  50 μL (管)  含WSSV和IHHNV目标基因片段的混合质粒。

阴性对照 (Negative Control)  1 mL (管)  无菌双蒸水或缓冲液。

�� 操作流程简述

样本采集与处理：

组织样本：取对虾的肝胰腺和鳃组织，加入PBS缓冲液研磨匀浆，离心取上清。

保存：若不能立即检测，样本应保存在-80℃或液氮中。

DNA提取：

使用商用基因组DNA提取试剂盒（柱提法/磁珠法）提取样本中的总DNA。

关键点：IHHNV是单链DNA病毒，WSSV是双链DNA病毒，提取时需确保DNA完整性。

试剂准备与加样：

将反应液、酶液、引物探针在冰上解冻并充分混匀，离心30秒。

按说明书比例配制反应体系（通常为20-25 μL），向反应管中加入提取的DNA模板（通常5-10 μL）。

必须设置：阴性对照（无菌水）和阳性对照（试剂盒提供）。

上机扩增：

将反应管放入荧光定量PCR仪。

推荐程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环反应：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（在此步收集荧光），进行40-45个循环。

结果判读：

WSSV阳性：FAM通道Ct值 < 38，且曲线呈指数增长。

IHHNV阳性：VIC/HEX通道Ct值 < 38，且曲线呈指数增长。

阴性：对应通道无Ct值或Ct值 ≥ 40。

质控要求：阳性对照在两个通道的Ct值均应≤35，阴性对照应无扩增曲线。

⚠️ 注意事项与安全提示

严格分区操作：为防止气溶胶污染导致假阳性，实验必须严格分区（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），且各区物品专用。

试剂保存：试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存。酶混合物对温度敏感，应避免反复冻融。

临床意义：

WSSV：致死率极高（可达90%以上），需早发现早处理。

IHHNV：感染后导致虾生长缓慢、畸形，严重影响经济效益。

双重检测有助于全面评估虾群健康状况，制定综合防控方案。

废弃物处理：反应结束后，严禁开盖，以免扩增产物（含荧光染料和DNA）污染环境。应将反应管密封后作为生物废弃物处理。

公司正在出售的产品：

PCR（聚合酶链式反应）是一种基因扩增技术，

用于检测或定量特定DNA/RNA序列。其核心是通过温度循环（变性、退火、延伸）扩增目标基因片段，而非培养生物体。

关键点：

无需培养：PCR直接检测样本中的核酸，无需预先培养微生物或细胞。

应用场景：病原体检测（如病毒、细菌）、基因表达分析、遗传病诊断等。