大鼠膈肌细胞

产品定义：

大鼠膈肌细胞是构成大鼠膈肌的肌细胞，主要为骨骼肌细胞，呈长梭形，具有收缩功能。膈肌是大鼠重要的呼吸肌，通过收缩和舒张改变胸腔容积，实现肺的通气功能，同时也参与维持腹内压稳定，是研究呼吸生理机制、肌营养不良及呼吸肌疲劳等疾病的重要细胞模型。

产品简介：

细胞详述

膈肌是位于胸腔与腹腔之间的肌肉纤维组织，其周围为肌腹，中央为腱膜，是机体重要的呼吸肌。

组织学上，膈肌属骨骼肌，成熟的骨骼肌纤维不具有增殖能力。骨骼肌卫星细胞是骨骼肌与肌膜之间的一种体积较小的细胞，排列在肌纤维的表面，当肌纤维损伤后，可分化为肌纤维修复损伤。随着组织发育的成熟，肌卫星细胞数量相对减少。

细胞特性

1） 细胞来源于实验动物正常膈肌组织。

2） 细胞鉴定：肌动蛋白（α-actin）免疫荧光染色为阳性。

3） 经鉴定细胞纯度高于90%。

4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5） 细胞生长方式：长梭状细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

推荐使用 delf原代骨骼肌 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂。
原代细胞传代：

传代时机判断

细胞汇合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度汇合导致接触抑制，影响增殖能力

观察细胞状态：细胞形态正常，无明显漂浮、污染迹象

消化环节控制

消化前准备：吸出旧培养基，用PBS轻轻冲洗细胞1-2次，去除血清（血清会抑制胰蛋白酶活性）

消化液选择：同原代分离，根据细胞类型选择合适的消化酶，胰蛋白酶消化时间一般为1-5分钟，胶原酶消化时间为10-30分钟

消化终止：显微镜下观察到细胞回缩变圆、间隙增大时，立即加入含血清的培养基终止消化，血清浓度不低于10%

细胞吹打：用移液器轻轻吹打细胞，避免过度用力导致细胞破裂，吹打次数一般为10-15次

传代比例控制

传代比例根据细胞生长速度调整：生长速度快的细胞（如成纤维细胞）可按1:3-1:6传代，生长速度慢的细胞（如内皮细胞、神经细胞）按1:2传代

首次传代比例可适当提高（如1:2），待细胞适应体外培养环境后再调整为常规比例

传代后培养

接种后轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，放入培养箱中培养

24小时内不要晃动培养瓶，避免细胞贴壁不牢

培养24-48小时后观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基，去除未贴壁的死细胞和细胞碎片
收货与处理流程：

1. 收货检查

收到细胞后首先观察T25培养瓶瓶身是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有异常及时联系。

2. 细胞复苏（仅针对冻存细胞）

将冻存管迅速放入37℃温水中摇晃融化，时间约1分钟

加入4-5ml完全培养基混匀，1000RPM常温离心4-5分钟

弃去上清液，补加1-2ml培养液吹匀，移入含5ml培养基的培养瓶中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度

3. 新鲜细胞处理

用75%酒精消毒培养瓶瓶身，拆下封口膜

放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的培养箱中静置3-4小时，稳定细胞状态后再进行后续操作

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