大鼠骨膜干细胞

产品定义：

大鼠骨膜干细胞是存在于大鼠骨膜内层的一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能。它可分化为成骨细胞、成软骨细胞和成纤维细胞等，参与骨的生长、发育及损伤修复过程，在骨缺损修复、骨组织工程及骨质疏松症等疾病研究中具有重要应用价值。

产品简介：

细胞详述

骨膜是覆盖在骨质表面的一层结缔组织。骨膜通过夏皮式纤维锚定在骨质上，充当外部肌肉组织和内部骨质的连接桥梁，这种结构有助于维持骨膜的完整性。

骨膜由两部分组成，外层疏松的纤维层与内层致密的细胞层，纤维层中含有成纤维细胞、胶原纤维、弹力纤维及微管等。细胞层中多为骨膜源干细胞，这种干细胞与骨髓来源的间充质干细胞类似，具有多向分化的潜能。

骨质修复、重塑和更新与骨膜中的干细胞密切相关。在正常生理状况下，骨膜组织发挥着维持骨质更新及重塑的作用，其中的干细胞既可以通过膜内成骨方式分化为成骨细胞，也可通过软骨内成骨方式分化为软骨细胞。

细胞特性

1) 细胞来源于实验动物正常关节骨膜组织。

2) 细胞鉴定：CD90或CD73免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂。
细胞培养指南：

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存

待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

复苏的原则

快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
通用注意事项：

无菌操作：所有操作全程在超净台内进行，定期对超净台、培养箱进行消毒，使用无菌的培养基、血清、试剂

细胞状态监测：每天观察细胞形态、密度、颜色变化，记录生长情况，若发现细胞出现污染、形态异常、生长缓慢等问题，及时处理

培养基更换：原代细胞培养初期每2-3天更换一次培养基，传代后每1-2天更换一次，根据培养基颜色变化（变黄表示营养耗尽）灵活调整

避免过度操作：原代细胞较为脆弱，避免频繁吹打、离心，尽量减少对细胞的机械损伤

冻存备份：原代细胞分离成功后，及时冻存部分细胞作为备份，冻存液使用90%血清+10%DMSO，采用梯度降温法冻存

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