重组蛋白生产流程:
通常包括以下几个核心步骤:
基因克隆:首先,科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列(目的基因)。
构建载体:将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中,这个载体就像是一个运输工具,
能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。
转入宿主:将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中,这个过程称为“转化”或“转染”。
表达与培养:宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养,其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息,开始大量生产目标蛋白。
纯化:通过一系列复杂的生物化学方法(如层析技术),将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来,以获得高纯度的产品。
产品概述:
该蛋白由NPHS2基因编码,是一种关键的膜整合蛋白,特异性表达于肾小球足细胞的裂孔隔膜(Slit Diaphragm)区域。其核心功能是作为分子支架,通过其C端结构域发生寡聚化,连接细胞膜上的受体(如Nephrin)与细胞内的肌动蛋白细胞骨架,从而维持肾小球滤过屏障的完整性与通透性。NPHS2的突变是导致常染色体隐性遗传的激素抵抗性肾病综合征(SRNS)的主要原因,常导致严重的蛋白尿和肾功能衰竭。此外,研究发现其表达水平和甲基化状态与多种获得性肾脏疾病(如狼疮肾炎、糖尿病肾病)的进展密切相关。
产品名称; Recombinant Human NPHS2
别名; nephrosis 2, nephrosis 2, idiopathic, steroid resistant, Nephrosis 2, idiopathic, steroid resistant (podocin), NPHS2, NPHS2 gene, PDCN, PODO_HUMAN, Podocin, SRN1
宿主; E.Coli
表达区间; 259-383
分子量; 34.2 KDa
标签; N-terminal His-IF2DI Tag
纯度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
操作要点:
电泳条件:使用15% SDS-PAGE凝胶,以提高对小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
转膜参数:采用湿转法,100 V、60–90分钟(4°C),使用PVDF膜(需甲醇预活化)。
抗体选择:
一抗:抗CST3多克隆抗体(如兔源抗体),推荐稀释比为1:1000。
二抗:HRP标记的山羊抗兔IgG,稀释比1:10,000。
显色方式:ECL化学发光法,预期条带位于~13.4 kDa处。
内参建议:由于CST3分子量较小,可选用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作为内参,避免条带重叠。
注意事项:
安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜,遵循实验室生物安全规范。
安全提示:仅限研究使用,避免接触临床样本;操作时需佩戴防护装备。
质量控制:产品纯度通过SDS-PAGE验证,确保生物活性稳定;避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。
兼容性:适用于多种实验体系,但需优化浓度以避免非特异性结合。
公司正在出售的产品:
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台桌清洁剂(饭桌、工作台、学生课桌椅等)a | P21基因表达北方杂交分析试剂盒 |
组织相容性复合物A2 | FGFR1癌基因伴侣蛋白抗体 |
角膜上皮蛋白TGFBI | 鸟苷酸还原酶1抗体 |
Rad52 | 成对螺旋细丝蛋白抗体 |
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AbBy Fluor® 5647标记的脑质膜单胺转运蛋白PMAT抗体 | ATP依赖RNA解旋酶DDX39抗体 |
关键字: NPHS2;34.2 KDa;34.2 KDa;
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