重组表达原理:
基因克隆:从牛基因组中获取CST3基因的编码序列(对应氨基酸31–148),插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。
宿主表达:将重组质粒转化至E. coli(如BL21菌株),在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高,适合大规模生产。
蛋白纯化:利用His标签与镍柱亲和层析结合,实现高纯度(>95%)蛋白回收,再经透析或凝胶过滤去除杂质。
冻干保存:加入海藻糖作为保护剂,冻干后可长期稳定储存,复溶后保持天然构象和生物活性。
产品概述:
NT5C2属于胞质5'-核苷酸酶家族,是一种高度调控的磷酸水解酶。其核心生理功能是维持细胞内嘌呤核苷酸池的平衡,主要催化肌苷一磷酸(IMP)和鸟苷一磷酸(GMP)的去磷酸化反应,生成相应的核苷(肌苷和鸟苷)。在病理条件下,NT5C2具有重要的临床意义:它是急性淋巴细胞白血病(ALL)复发的关键驱动因子。NT5C2的功能获得性突变(如R367Q, R238W)会导致其酶活性失控,进而将化疗药物6-巯基嘌呤(6-MP)的活性代谢物去磷酸化并排出细胞,导致肿瘤细胞产生耐药性。
产品名称; Recombinant Human NT5C2
别名; 5' nucleotidase (purine) cytosolic type B, 5NTC_HUMAN, cN II, Cytosolic 5''-nucleotidase II, Cytosolic IMP/GMP-specific 5'-nucleotidase, Cytosolic purine 5' nucleotidase, Cytosolic purine 5''-nucleotidase, GMP, NT5B, nt5c2, NT5CP, NUCLEOTIDASE, 5-PRIME, CYTOSOLIC II, NUCLEOTIDASE, 5-PRIME, TYPE B, PNT5, PURINE 5-PRIME-NUCLEOTIDASE
宿主; E.Coli
表达区间; 1-561
分子量; 61.6 kDa
标签; N-terminal His Tag
纯度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
使用前准备:
离心处理
冻干粉在运输过程中可能附着于管壁或管盖,开盖前应先进行离心,确保粉末沉降至管底。
建议条件:3000–3500 rpm 离心 5 分钟
若无高速离心机,可适当延长低速离心时间
平衡温度
将冻干粉缓慢恢复至室温(避免加热加速溶解),防止因温差导致管内冷凝水影响蛋白稳定性
溶解(Reconstitution)
溶解液选择
推荐使用无菌蒸馏水或 PBS(pH 7.4)进行复溶
若用于细胞实验,可选用含 0.1% BSA 的缓冲液以增强稳定性
配制浓度
将冻干粉溶解至终浓度 0.1–1.0 mg/mL,此范围适用于大多数实验场景
浓度过高可能导致蛋白聚集,过低则易失活
混匀方式
使用移液枪头轻轻吹打数次,或上下轻柔颠倒混匀
严禁使用涡旋振荡器,以免破坏蛋白空间结构,导致活性丧失
公司正在出售的产品:
碳酸氢钠协同转运蛋白4-A8 | 血液D-葡萄糖激酶法定量酶联免疫试剂盒 |
FC段γ受体3/免疫球蛋白G Fc段受体III单克隆 | CASPASE-8蛋白表达西方杂交分析试剂盒 |
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP3A4(BFCD)活性 | MYC蛋白表达ELISA定量酶联免疫试剂盒 |
组织WNV(WEST NILE)病毒定性pcr检测试剂盒 | 组织糖胺多糖(GAG)总含量二甲基亚甲基蓝(DMMB)比色法定量酶联免疫试剂盒 |
无脊椎动物和昆虫体液基质金属(MMP)总活性比色法定量pcr检测试剂盒 | 猫眼综合征染色体候选基因5抗体 |
骨骼肌烯醇化酶 | 多胺氧化酶PAOX抗体 |
10倍Hanks平衡盐缓冲溶液(HBSS) | 细胞结构型神经元一氧化氮合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量pcr检测试剂盒 |
树脂法血迹DNA萃取试剂盒 | 组织肾素(renin)荧光共振能量转移法(FRET)定量pcr检测试剂盒 |
轴突导向受体 | 早老素γ分泌酶2抗体 |
己糖6磷酸脱氢酶 | AF647标记人CD11c单克隆抗体 |
RasGTP酶激活蛋白IQGAP3 | 磷酸化补体成分5受体1抗体 |
胱抑素C单克隆(检测) | Recombinant Human NT5C2Y染色体开放阅读框15B抗体 |
细胞花生四烯酸(arachidonic acid)酶反应比色法定量检测试剂盒 | IQCD蛋白抗体 |
注意事项:
安全提示:仅限研究使用,避免接触临床样本;操作时需佩戴防护装备。
质量控制:产品纯度通过SDS-PAGE验证,确保生物活性稳定;避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。
兼容性:适用于多种实验体系,但需优化浓度以避免非特异性结合。
关键字: NT5C2;61.6 kDa; 1-561;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物专注于实验室和公共卫生领域,利用互联网、数据分析及自动化技术,包括实验室固定资产、仪器设备、生物样本、化学品、试剂、配件耗材、环境、仪器自动化和高通量筛选等一体化综合管理平台。不断为各行业实验室细胞生命学产品、技术服务、免疫学和分子学产品,截止至2024年5月,西格生物已为生命科学、检验检测、化工材料、科研院所、政府机构多行业300余家知名客户提供实验室完整解决方案。本着帮助用户实现“让科研场所更智能、让科研人员更专注、让科学服务更高效“的愿景,西格生物将继续在实验室科研产品领域持续发力,更加重视本土化,建构通用性高、适应性好、模块搭配灵活,能快速响应客户需求的产品。