DB3.1 大肠杆菌

商品属性：

产品描述：

DB3.1大肠杆菌是实验室常用的工程菌株，属于大肠杆菌K-12衍生菌株。该菌株携带gyrA462和ΔendA1突变，对卡那霉素、四环素等抗生素具有抗性，并且缺失了endA基因，可降低质粒被核酸酶降解的风险。它不能表达λ噬菌体的Int整合酶和Xis切除酶，因此无法在体内进行质粒的整合与切除，常被用于质粒的构建、扩增与保存，尤其适用于对含有ccdB毒性基因的质粒进行操作，因为DB3.1菌株对ccdB蛋白具有抗性，能在含ccdB基因的质粒存在下正常生长。
培养基  蛋白胨：10.0，牛肉粉：3.0，氯化钠：5.0，琼脂：15.0，pH值：7.3±0.1(25℃)

生长条件  37℃；18-24h；好氧

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为1-2mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，中间凸起，表面光滑，表面明亮，质地湿润，易挑起，G－（红），杆菌，纯度：纯

模式菌株  no

操作步骤  ①准备上述平板2块；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入2块平板，200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

共享方式  公益性共享

菌种标准操作步骤:

一、准备工作

穿实验服、戴手套、口罩，在超净工作台内操作。

灭菌：培养基、枪头、离心管、接种环 / 针、生理盐水。

工作台紫外照射20–30 min，通风后开始。

二、菌种活化

取冻存菌种 / 安瓿菌种，室温 / 冰上缓慢解冻。

接种环火焰灭菌，冷却后蘸取少量菌液。

在固体培养基（如 LB、营养琼脂）上划线分离。

倒置培养：

细菌：37℃，12–24 h

真菌：28℃，48–72 h

三、挑单克隆扩大培养

挑取形态一致、边缘整齐的单菌落。

接种到液体培养基或新鲜斜面。

摇床 / 静置培养至对数生长期（OD 合适、浑浊）。

四、菌种传代

取少量菌液 / 菌落，接种到新培养基。

控制传代次数，避免多次传代导致性状退化。

每次传代做好记录：日期、代数、操作人、生长情况。

实验后处理:

菌种保存

将实验后的菌种进行冻存（如-80°C甘油保存或液氮保存）。

记录保存信息，便于后续使用。

废弃物处理

将实验废弃物（如培养基、菌液）进行高温灭菌处理。

按照实验室规定分类处理废弃物，避免环境污染。

实验总结

撰写实验报告，总结实验过程、结果及结论。

分析实验中的问题与改进措施。

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