单增李斯特氏菌 新品

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单增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是李斯特氏菌属的一种革兰氏阳性杆菌，兼性厌氧，无芽孢，有鞭毛，能运动。该菌是一种重要的食源性致病菌，广泛存在于自然环境、食品及动物肠道中，可通过污染的食物（如肉类、乳制品、蔬菜等）传播给人类，引起李斯特菌病。患者感染后可出现发热、头痛、恶心、呕吐等症状，严重时可导致败血症、脑膜炎、孕妇流产等并发症，死亡率较高，尤其对免疫力低下人群、孕妇、胎儿和老年人危害较大，是食品安全领域重点防控的病原菌之一。
培养基  牛脑浸粉：4.0，牛心浸粉：4.0，蛋白胨：5.0，酪蛋白胨：16.0，氯化钠：5.0，葡萄糖：2.0，磷酸氢二钠：2.5，琼脂：13.5，pH：7.4±0.2（25℃）

生长条件  37℃；18-24h；好氧

生长特性  G+短棒状小杆菌，有动力，过氧化氢酶阳性，血平板上产生β-溶血；硝酸盐还原实验阴性，尿素酶试验阴性，不发酵木糖、甘露醇；甲基红反应阳性，伏-普实验阳性，发酵葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、鼠李糖；三糖铁试验产酸、不产硫化氢；兼性厌氧，最适pH7.4~7.6。

存储条件  2-8℃

安全等级  2

形态  菌落直径为0.5-1mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，中间凸起，表面光滑，表面明亮，质地湿润，易挑起，不产色素，G＋（蓝紫色），杆菌，纯度：纯

模式菌株  no

操作步骤  ①准备上述平板 1-2 块；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入平板中 200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

应用领域  研究、质量控制，《GB 4789.30-2010单核细胞增生李斯特氏菌检验》阳性对照菌株。

共享方式  公益性共享

菌种保藏方法：

一、传代保存法

对于一些稳定性不高，对环境变化较为敏感的微生物菌种，一般只能采用传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法。

二、液体石蜡覆盖保存法

该法适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其方法简便，且适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存。

三、悬液保存法

这是一种使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法，具体方法有：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

四、载体保存法

将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种：

①土壤保存法；

②砂土保存法；

③硅胶保存法；

④磁珠保存法；

⑤麸皮保存法

⑥纸片(滤纸)保存法。

实验内容：

1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

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