人肾成纤维细胞
产品信息:

英文名称 | Human Renal Fibroblast Cells | 种属 | 人 |
产品规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | A01X1340 |
组织来源 | 肾组织 | 生长特性 | 贴壁 |
细胞简介:

人肾成纤维分离自肾组织;肾脏是机体的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物,同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质,如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、等,以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能,生成肾素、促红细胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等,又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能,保证了机体内环境的稳定,使新陈代谢得以正常进行。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损以及骨创伤的修复有着十分重要的作用。肾成纤维细胞是肾脏结缔组织中重要的细胞类型,在体外培养中,一般大致成梭形、多角形或不规则形等,为贴壁生长型细胞。刚分离的肾成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。其主要功能有:①组成过滤屏障内壁的重要部分;②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子;③受损后影响系膜细胞和上皮细胞,进而影响肾脏病变。
方法简介 公司实验室分离的人肾成纤维采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的人肾成纤维经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
关键操作技巧与注意事项:

成功的原代培养依赖于严谨的细节控制:
严格无菌操作:这是实验成功的基石。所有操作需在生物安全柜中进行,试剂和耗材必须无菌。
保持静置:细胞接种后的最初24-48小时内,应保持培养瓶绝对静置,避免频繁取出观察或晃动,这有助于细胞贴壁和伸展。
优化消化过程:
消化时间要恰到好处,过长会损伤细胞,过短则细胞分散不佳。
胶原酶对组织的损伤较小,常用于分离活性要求高的细胞;胰蛋白酶作用较强,需严格控制时间。
酶液应新鲜配制,避免活性下降。
控制接种密度:原代细胞在低密度下不易存活,建议适当提高初始接种密度,以保证细胞间的相互作用促进其生长。
定期换液:根据培养基颜色变化(如变黄)或每隔2-3天更换一次培养液,以清除代谢废物并补充营养。
公司正在出售的产品:

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猪颈动脉平滑肌细胞 | Porcine primary pulmonary fibroblasts |
细胞培养操作

消化培养法
此方法利用酶(如胰蛋白酶、胶原酶)将组织分散成单个细胞或细胞团,形成细胞悬液进行培养,细胞生长较快。
取材与剪切
同样在无菌条件下获取组织,并用Hanks液清洗干净。
将组织剪切成更小的碎块(约 1 mm³),以便酶更好地发挥作用。
酶消化
将组织块转移至容器中,加入适量的酶消化液(如0.25%胰蛋白酶)。
在 37℃ 条件下消化 20-40分钟,期间可适当摇动或吹打。消化程度需在显微镜下观察,当组织分散成细胞团或单个细胞时,立即终止消化。
终止与洗涤
加入含血清的培养液以终止酶的消化作用(血清可抑制胰蛋白酶活性)。
将细胞悬液通过筛网过滤,除去未消化的组织块。然后以 1000 rpm 离心 5-10分钟,弃去上清液。
接种与培养
用适量新鲜培养液重悬细胞沉淀,进行细胞计数,并调整细胞密度至实验所需浓度(例如 5×10⁵ cells/mL)。
将细胞悬液分装至培养瓶中,放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中静置培养。
关键字: 人肾成纤维细胞;肾组织;贴壁;
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