巯基检测:2 - 硝基 - 5 - 硫代磺基苯甲酸通常由 5,5'- 二硫双 (2 - 硝基苯甲酸)(DTNB)与巯基反应生成。DTNB 是一种用于量化样品中硫醇基团数量或浓度的化学物质,它与硫醇化合物反应时,无色的 DTNB 会变成黄色的 2 - 硝基 - 5 - 硫代苯甲酸。该物质在 412nm 处有最大吸收,通过测量吸光度,可定量检测蛋白质、多肽、组织中的巯基含量,也可用于测量纯溶液和生物样品中的低分子量硫醇,如谷胱甘肽。
有机磷农药中毒监测:DTNB 可用于乙酰胆碱酯酶测定,通过检测乙酰胆碱酯酶的活性来监测有机磷农药中毒情况。有机磷农药会抑制乙酰胆碱酯酶的活性,而 DTNB 可以作为显色剂,通过吸光度反映酶的抑制率值,最终用来初步判断农药是否超标。
蛋白质结构与功能研究:DTNB 可以修饰酶的巯基基团,能够确定每个分子中巯基基团的数量及其对酶活性的贡献,还可用于特异性标记半胱氨酸残基,从而研究蛋白质的结构和功能。此外,DTNB 修饰还可促进蛋白质结晶,如通过诱导晶格中的极性相互作用促进 CcbP 的结晶,且对 CcbP 的整体结构和 Ca²⁺结合几乎没有影响。
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