基本描述
产品名称：T7 RNA Polymerase
规格或纯度：BioReagent,通过内毒素测试,分子生物学级,EnzymoPure™,无RNA酶,重组,≥98.0%,50 U/μL
产品介绍：
T7RNA聚合酶是一种来源于T7噬菌体的一种依赖于DNA的RNA聚合酶，具有高度特异性的5'→3'端的RNA聚合酶活性。T7RNA聚合酶对T7启动子具有较高的特异性，能够以T7启动子下游序列为模板合成大量的RNA。
产品组分
| T292917 | Component | 50 μL | 250 μL | 1 mL | Storage | | T292917A | T7 RNA 聚合酶 | 50 μL | 250 μL | 1 mL | -20°C. Avoid freeze/thaw cycle | | T292917B | 10×HH T7 Buffer | 2×50 μL | 2×250 μL | 2×1 mL | -20°C. Avoid freeze/thaw cycle |
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使用说明
体系配制（50μl）
| 组分 | 体积 |
Nuclease-free water/DEPC
| Up to 20 μL
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10×HH T7 Buffer
| 2 μL
|
ATP/GTP/CTP/UTP (100mM each)
| 0.4 μL each (2mM each Final)
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RNase inhibitor
| 1 μL (40 U)
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Inorganic pyrophosphatase
| 0.5 μL (0.05 U)
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T7 RNA Polymerase (50 U/μL)
| 1 μL
|
Linearized template DNA
| 1 μg
|
10×HH T7 Buffer: 400 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.20), 60 mM MgCl2, 100mM DTT, 20mM spermidine.
按以上顺序添加反应组分*10xHH T7 Buffer 只适用于 2mM 终浓度的NTPS 投料量，如需7.5mM-10mM 投料量，请选用高产试剂盒系列产品。
反应时间：37℃℃孵育2 h。
反应终止：加入2 μL 0.2 M EDTA (pH = 8.0@ 25°℃)或者 75°℃ 加热 10 min。
DNA 模板去除：可用 DNasel(2 U) 37°C处理 15 min。
质量控制
1) 核酸内切酶残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1μgλDNA在37°C下反应16小时，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
2) 核酸外切酶残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1μgλ-HindIIIdigestDNA在37°C下孵育16小时，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
3) 核酸切口酶残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1μgpBR322DNA在37°C下孵育16小时，琼脂糖凝胶电泳DNA谱带不发生变化。
4) RNase残留检测：50μL反应体系中加入50U本酶和1.6μgMS2RNA在37°C下孵育16小时，琼脂糖凝胶电泳RNA谱带不发生变化。
5) 热失活：75°C，10min
注意事项
1、转录反应配制应在无 RNase 污染的环境中完成，操作过程建议佩戴手套。使用无核酸酶的水、吸头和反应管进行体系配制。
2、可以通过提高 NTP 浓度(每个浓度可达 10mM)，提高 RNA产量，同时需要适当增加Mg”浓度。
3、反应体系需要在室温下配制，避免在4℃时 DNA 与 10xHH T7 Buffer 发生反应产生沉淀。
4、模板 DNA 线性化不完全，可能降低转录产物产量和长度。
5、反应体系体积可根据实际需求按比例进行放大或缩小。
6、反应产物若出现下降，可向反应体系加入20 mM 新鲜 DTT。
7、转录片段≤500bp，建议延长转录时间为4-8 h.
8、10xHH T7 Buffer 冻存后容易产生沉淀在使用前请确认是否完全溶解，如果有沉淀产生，可于 37 ℃充分加热后摇晃复溶
9、10xHH T7 Buffer 只适用于 2mM 终浓度的 NTPS投料量，如器7.5mM-10mM 投料量，请选用高产试剂盒系列产品。
生物活性：50 U/μL
Accession #：P00573
级别：重组, BioReagent, 通过内毒素测试, 分子生物学级, EnzymoPure™, 无RNA酶
产品规格参数
储存缓冲液：50mM Tris-HCl, 100mM NaCl, 20mM β-ME, 1mM EDTA, 50% Glycerol, 0.1%(w/v) Triton® X-100, pH 7.9
浓度：50 U/μL
储存温度：-20°C储存,避免反复冻融
运输条件：超低温运输
稳定性与储存：长期储存-20℃（24个月）；收货后建议分装，避免反复冻融。
CAS编号和信息：9014-24-8
酶学委员会编号：2.7.7.6
单位定义：在标准反应体系下，37°C 1小时内催化NTP生成1nmol的PPi所需要的酶量定义为一个活性单位(U)。
功能和特点
Accession #：P00573
生物活性：50 U/μL
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关键字： T7 RNA聚合酶 ; T7 RNA 聚合酶;T7 RNA Polymerase
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