人ICAM-3elisa试剂盒
一、核心原理与技术特点
双抗体夹心ELISA原理：
采用高亲和力单克隆/多克隆抗体对
预包被抗人ICAM-3捕获抗体（通常识别D1结构域）
酶标记检测抗体（HRP或ALP偶联）识别不同表位
动态范围通常为15.6-1000 pg/mL，灵敏度可达3-5 pg/mL
英文名称 | Human ICAM-3 ELISA Kit | 产品类别 | Human/人Elisa试剂盒 |
货号 | A129759 | 规格 | 48T/96T |
技术优势：
可检测天然和重组人ICAM-3
与ICAM-1/ICAM-2交叉反应性<0.01%
板内变异系数<6%，板间变异系数<10%
二、试剂盒标准配置
预包被微孔板：96孔（8×12可拆）或48孔规格
重组人ICAM-3标准品：冻干粉（0-1000 pg/mL梯度）或即用型液体
检测抗体：生物素化抗人ICAM-3抗体（100×浓缩）
信号系统：
链霉亲和素-HRP（或ALP）偶联物
TMB显色底物（避光保存）
终止液（0.5M H?SO?）
辅助试剂：
20×洗涤缓冲液（含Tween-20）
样本稀释液（含BSA稳定剂）
板封膜（防蒸发）
三、关键实验参数
参数 规格
样本类型 血清（推荐分离后-80℃保存）、EDTA/肝素血浆、细胞上清（需离心去除碎片）
样本体积 50-100μL（1:2稀释后检测）
总检测时间 3.5小时（含2小时孵育）
检测波长 450nm（校正波长540/570nm）
稳定性 未开封4℃保存6个月，开封后组分按说明书保存（酶结合物需避光）
四、操作流程优化要点
样本前处理：
避免反复冻融（≤3次）
脂血样本需10,000×g离心15分钟
含颗粒物样本需0.22μm过滤
标准曲线建立：
推荐使用4参数logistic曲线拟合
必须包含空白孔（零标准品+检测抗体）
质量控制：
每板应设置：空白对照、标准曲线、内部质控品
可接受标准：R2≥0.99，质控品回收率90-110%
五、临床应用与数据解读
生理与病理水平参考：
健康人群：血清浓度通常<200 pg/mL
炎症性疾病：类风湿关节炎患者可达500-800 pg/mL
血液系统疾病：白血病患者骨髓液可>1000 pg/mL
免疫调节研究：T细胞活化后培养上清显著升高
诊断价值：
与sICAM-1联合检测可提高慢性炎症评估特异性
动态监测有助于评估免疫治疗响应（如CAR-T治疗后3天常出现峰值）
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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：
稀释线性实验 (Linearity)：
操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。
预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test)：
操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。
预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。
回收实验 (Recovery Test)：
操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。
预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”？
A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗？
A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？
A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。
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