一、核心检测原理与技术演进：
第四代双抗夹心ELISA技术：
采用高特异性抗体对：捕获抗体（抗人Lipocalin-2单抗，表位定位25-38aa）与检测抗体（生物素化多抗，识别89-101aa）
产品名称 | 人Lipocalin-2elisa试剂盒 | 英文名称 | Human Lipocalin-2 ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A129756 |
信号放大系统：链霉亲和素-辣根过氧化物酶（SA-HRP）复合物配合增强型TMB底物
创新防交叉设计：通过表位筛选技术，与MMP-9/NGAL复合物的交叉反应<0.5%
2025年技术升级：
新增血浆样本直接检测功能（无需去纤维蛋白原处理）
标准品改用NIST SRM 2921可溯源重组蛋白
微孔板升级为超低吸附表面（CV降低至3.8%）
二、试剂盒完整配置与存储
标准组件：
预包被96孔板（8×12可拆，独立铝箔包装）
冻干标准品（6梯度：0-1000 ng/mL，含CRM证书）
即用型检测抗体（生物素标记，4℃稳定6个月）
多功能稀释液（适用血清/血浆/尿液/脑脊液）
关键存储条件：
组分 存储温度 稳定性
未开封试剂盒 -20℃ 24个月
复溶标准品 4℃ 7天
酶结合物 避光4℃ 3个月
显色底物 2-8℃（避光） 6个月
三、实验流程优化方案
样本处理关键点：
尿液样本：需离心（10,000×g，10分钟）后1:5稀释
血清/血浆：避免使用肝素钠抗凝（可能导致假阳性）
组织匀浆：建议添加蛋白酶抑制剂（如1mM PMSF）
标准化操作流程：
加样：标准品/样本100μL/孔（推荐使用电子移液器）
一抗孵育：37℃震荡（600rpm）90分钟
洗涤：自动洗板机5次（浸泡时间30秒/次）
二抗反应：加入检测抗体（1:200稀释），室温静置45分钟
信号检测：酶标仪双波长读取（450nm/630nm）
四、临床应用数据解读
疾病诊断临界值：
急性肾损伤：尿NGAL >150ng/mL（敏感性92%，特异性88%）
脓毒症：血清水平 >450ng/mL预示器官衰竭风险
心血管疾病：>300ng/mL与动脉粥样硬化斑块不稳定性相关
最新临床共识（2025）：
建议与KIM-1联合检测提高AKI诊断特异性
术后2小时尿NGAL水平可预测心脏手术相关AKI
在糖尿病肾病中，血清水平与eGFR呈显著负相关（r=-0.73）
五、质量控制与问题排查
必检参数标准：
标准曲线R2值≥0.995
空白孔OD值<0.12
质控品回收率应在85-115%之间
常见问题解决方案：
现象 可能原因 纠正措施
标准曲线扁平 抗体活性下降 更换新批次酶结合物
背景值过高 洗涤不充分 增加洗涤次数至7次
孔间差异大 加样不准确 校准移液器，改用反向吸液技术
试剂与样本准备阶段
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
公司正在出售的产品：
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冰冻切片总（酯酶法）菲律宾（FILIPIN）荧光染色试剂盒 | 子宫珠蛋白相关蛋白1/肺炎分泌蛋白1抗体 |
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INSULIN 蛋白表达西方杂交分析试剂盒 | 蛋白质西方杂交免疫印迹消除试剂盒 |
ELISA试剂盒的主要优点缺点
维度 优势 (Pros) 劣势 (Cons)
检测性能 灵敏度极高，特异性强，结果准确 可能存在交叉反应，易受干扰物影响
操作体验 流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测 步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求
经济成本 适合大批量样本检测，长期看性价比尚可 单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异
应用范围 可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本 对样本质量（如是否溶血）敏感
关键字： 人;Lipocalin-2 ;ELISA试剂盒;
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