人MIG/CXCL9elisa试剂盒
产品简介:
1. 试剂盒基本信息
检测目标：人γ干扰素诱导单核因子（MIG/CXCL9），属于CXC趋化因子家族，主要由IFN-γ诱导产生，参与Th1型免疫反应和T细胞募集。
检测方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）。
英文名称 | Human MIG/CXCL9 ELISA Kit | 产品类别 | Human/人Elisa试剂盒 |
货号 | A129757 | 规格 | 48T/96T |
样本类型：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆等。
灵敏度：通常 <5 pg/mL（不同品牌可能有所不同）。
检测范围：常见 15.6–1000 pg/mL（部分试剂盒可扩展到 7.8–2000 pg/mL）。
特异性：仅检测天然或重组人CXCL9，不与CXCL10（IP-10）、CXCL11（I-TAC）或其他趋化因子交叉反应。
2. 试剂盒组成（96T）
组分 规格 储存条件
预包被抗CXCL9抗体微孔板 96孔 2–8℃（干燥）
重组人CXCL9标准品 冻干粉或液体（0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL） -20℃
生物素标记抗CXCL9检测抗体 1瓶（120 μL） -20℃
HRP标记链霉亲和素 1瓶（120 μL） -20℃
TMB显色液 10 mL 4℃（避光）
终止液（1M H?SO?） 10 mL 室温
洗涤缓冲液（20×PBS-Tween） 50 mL 室温
样本稀释液/封闭液 20 mL 2–8℃
封板膜 2张 室温
3. 检测原理
抗原捕获：样本中的CXCL9与预包被在微孔板上的抗体结合。
信号放大：加入生物素标记的二抗，形成“抗体-CXCL9-生物素二抗”复合物。
酶催化显色：HRP-链霉亲和素与生物素结合，催化TMB显色（蓝色→黄色）。
定量分析：450 nm测OD值，CXCL9浓度与吸光度成正比。
4. 操作步骤（简要）
标准品复溶与稀释（按说明书梯度稀释）。
加样：100 μL/孔（标准品、样本、空白对照），37℃孵育 1.5–2小时。
洗涤：用1×洗涤液洗板 3–5次。
加检测抗体：100 μL/孔，37℃孵育 1小时。
加酶结合物：100 μL/孔，37℃孵育 30分钟。
显色：加TMB避光反应 10–15分钟（显蓝色）。
终止：加终止液（变黄色），30分钟内测 450 nm（参考630 nm）。
数据分析
使用 四参数逻辑回归（4PL） 拟合标准曲线。
样本浓度 = 计算值 × 稀释倍数（如样本稀释5倍，则结果×5）。
6. 应用领域
感染与免疫：CXCL9在病毒感染（如HCV、HIV）、结核病中高表达。
自身免疫病：类风湿关节炎（RA）、系统性红斑狼疮（SLE）等Th1型疾病研究。
肿瘤免疫：评估肿瘤微环境中T细胞浸润（如黑色素瘤、肺癌）。
药物开发：监测IFN-γ相关疗法（如免疫检查点抑制剂）的疗效。
关键注意事项
? 样本处理
血清/血浆：避免溶血，离心后分装保存（-80℃长期储存）。
细胞上清：去除细胞碎片，避免反复冻融（≤3次）。
? 实验优化
若OD值超出标准曲线范围，需调整样本稀释比例。
每步孵育后充分洗涤（避免残留导致高背景）。
? 干扰因素
避免使用 （?）（抑制HRP活性）。
高脂血样本需超速离心后检测。
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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：
稀释线性实验 (Linearity)：
操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。
预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test)：
操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。
预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。
回收实验 (Recovery Test)：
操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。
预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”？
A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗？
A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？
A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。
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