人Osteoprotegerinelisa试剂盒
产品简介:
1. 试剂盒基本信息
检测目标:人骨保护素(Osteoprotegerin, OPG/TNFRSF11B)
检测方法:双抗体夹心ELISA(Sandwich ELISA)
样本类型:血清、血浆(EDTA/肝素)、细胞培养上清、骨组织匀浆液
灵敏度:<10 pg/mL(高灵敏度版本可达<5 pg/mL)
检测范围:15.6-1000 pg/mL(部分高范围试剂盒31.2-2000 pg/mL)
检测时间:约3.5小时(快速检测试剂盒约2小时)
特异性:不与其他TNF受体家族成员(如RANK、TRAIL受体)交叉反应
英文名称 | Human Osteoprotegerin ELISA Kit | 产品类别 | Human/人Elisa试剂盒 |
货号 | A129749 | 规格 | 48T/96T |
2. 试剂盒组成(96孔板)
组分 规格 保存条件 说明
预包被微孔板 8×12孔 2-8℃ 抗人OPG单抗包被
OPG标准品 冻干粉×1 -20℃ 复溶后0-1000 pg/mL
检测抗体 120 μL -20℃ 生物素标记抗人OPG
酶结合物 120 μL -20℃ Streptavidin-HRP
TMB底物 10 mL 4℃(避光) 即用型
终止液 10 mL RT 1M H?SO?
洗涤液 50 mL RT 20×浓缩液
样本稀释液 20 mL 2-8℃ 含蛋白稳定剂

3. 检测原理
捕获阶段:样本OPG与预包被抗体结合
检测阶段:生物素化二抗特异性识别OPG
信号放大:Streptavidin-HRP催化TMB显色
定量分析:450nm吸光度与OPG浓度成正比
4. 实验操作流程
样本准备:
血清/血浆:室温静置30分钟后,1000×g离心15分钟
细胞上清:直接检测或1:2稀释
骨组织:按1:5(w/v)用PBS匀浆,10000×g离心10分钟
标准曲线制备:
graph LR
A[标准品复溶] --> B[系列稀释]
B --> C[0,15.6,31.2,62.5,125,250,500,1000 pg/mL]
检测步骤:
加样:100μL/孔(标准品/样本)
孵育:37℃ 120分钟
洗涤:自动洗板机洗5次
加检测抗体:37℃ 60分钟
加酶结合物:37℃ 30分钟
显色:室温避光15分钟
终止:50μL/孔终止液
读数:450nm(参考630nm)
5. 数据分析
标准曲线拟合:
(四参数逻辑回归方程)
质量控制要求:
标准曲线R2>0.99
复孔CV<10%
质控样本回收率85-115%
6. 应用领域
骨代谢研究:
骨质疏松症诊断
绝经后骨丢失监测
糖皮质激素性骨质疏松
肿瘤研究:
多发性骨髓瘤骨病
乳腺癌骨转移
心血管疾病:
血管钙化评估
动脉粥样硬化研究
其他领域:
类风湿性关节炎
慢性肾病矿物质骨代谢异常
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如何验证试剂盒的特异性?(实操建议):
稀释线性实验 (Linearity):
操作: 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释(如1:2, 1:4, 1:8...)。
预期: 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系(相关系数 R² ≥ 0.98)。如果线性不好,说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test):
操作: 在已知浓度的目标抗原溶液中,加入高浓度的潜在干扰物(如高浓度的脂质或结构类似物),检测其对结果的影响。
预期: 若检测值与理论值偏差在±10%以内,说明抗干扰能力强,特异性好。
回收实验 (Recovery Test):
操作: 在样本中加入已知量的标准品,检测总含量,计算回收率。
预期: 回收率在80%-120%之间,说明试剂盒能准确识别目标,不受样本背景干扰。
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”?
A: 建议每个样本(包括标准品)都做复孔(2-3个孔)。这样可以计算平均值,减少操作误差,提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗?
A: 是的。如果样本浓度过高,超出了标准曲线的检测范围,需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时,记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”(背景不均)怎么办?
A: 可能原因包括:洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂(如底物)受光照分解。请检查洗板机是否堵塞,确保温育箱温度恒定。
关键字: 人;Osteoprotegerin ;ELISA试剂盒;
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