人Thioredoxin-1elisa试剂盒
一、技术原理与创新特性
高特异性检测体系：
双抗体夹心设计：采用抗人Trx-1单抗（克隆ADF 11）作为捕获抗体，结合HRP标记检测抗体（克隆2B1）靶向Cys73活性中心
氧化还原状态检测：通过特殊还原缓冲液可区分还原型（active）与氧化型（inactive）Trx-1
抗干扰优化：添加5mM DTT可防止样本中Trx-1二聚体形成
英文名称 | Human Thioredoxin-1 ELISA Kit | 产品类别 | Human/人Elisa试剂盒 |
货号 | A129758 | 规格 | 48T/96T |
2025年技术升级：
新增胞内/胞外Trx-1分型检测功能
标准品溯源至日本JCRB细胞库（JCRB9065）
采用电化学发光技术（ECL）提升灵敏度10倍
二、试剂盒配置与关键参数
标准组件清单：
预包被96孔板（12条×8孔独立包装，充氩气保存）
重组人Trx-1标准品（7梯度：0.05-20 ng/mL，NIST可溯源）
检测系统：
钌标记二抗（4℃避光稳定12个月）
TPA电化学发光底物
专用裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂cocktail）
性能指标：
参数 规格 生物学意义
检测范围 0.05-20 ng/mL 涵盖胞内外浓度范围
灵敏度 0.015 ng/mL 可检测早期氧化应激
精密度 板内CV<4%，板间CV<7% 满足GLP要求
特异性 与Trx-2交叉反应<0.01% 确保检测准确性
三、实验操作标准化流程
样本处理关键点：
细胞样本：建议使用非还原性裂解液（避免破坏二硫键）
血浆制备：EDTA抗凝优于肝素（防止金属离子干扰）
稳定性数据：
4℃保存≤48小时（需添加10mM NEM）
-80℃可保存1年（避免反复冻融）
优化操作步骤：
样本预处理：含5mM碘乙酰胺的PBS阻断游离巯基
加样策略：采用之字形加样顺序
关键孵育：37℃微孔板振荡器（700rpm）孵育90分钟
信号读取：MSD电化学发光仪（积分时间500ms）
四、临床应用与科研价值
疾病关联阈值：
ARDS诊断：BALF中Trx-1 >8 ng/mL预示死亡率升高
肝癌筛查：血清水平 >15 ng/mL联合AFP提高早期诊断率
糖尿病并发症：氧化型/还原型比值 >0.6提示微血管病变
2025年研究突破：
发现Trx-1通过TXNIP-NLRP3轴调控细胞焦亡
重组人Trx-1（rhTrx）治疗辐射损伤进入II期临床
单细胞质谱揭示神经元亚群特异性Trx-1表达模式
五、质量控制与问题处理
质控标准：
标准曲线要求：5参数拟合R2≥0.995
必检参数：
空白信号<800 RLU
质控品回收率92-107%
故障排除指南：
异常现象 可能原因 解决方案
信号漂移 温度波动 使用带PID控制的孵育箱
孔间差异 板条变形 检查包装是否完好，更换新板
背景升高 洗涤不彻底 增加洗涤液体积至300μL/孔
公司正在出售的产品：
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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：
稀释线性实验 (Linearity)：
操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。
预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test)：
操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。
预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。
回收实验 (Recovery Test)：
操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。
预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”？
A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗？
A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？
A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。
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