兔Angiopoeitin-2(ANG-2)elisa试剂盒
产品简介:
是用于精准检测这一关键血管调节因子的专业工具。作为血管内皮特异性生长因子，ANG-2在血管重塑、肿瘤血管生成和炎症反应中发挥核心调控作用。以下为基于当前最新技术标准的全面解析。
英文名称 | Rabbit Angiopoeitin-2(ANG-2) ELISA Kit | 产品类别 | Rabbit/兔Elisa试剂盒 |
货号 | A129988 | 规格 | 48T/96T |
一、技术原理与创新特性
受体竞争检测系统：
结构域特异性识别：采用抗兔ANG-2纤维蛋白原样结构域单抗（克隆ANG2-4C1）作为捕获抗体，结合Tie2结合区检测抗体（克隆ANG2-2B3），可评估与Tie2受体的竞争性结合能力
寡聚体状态分析：通过非还原电泳预处理区分单体与多聚体形式
抗干扰优化：添加重组ANG-1（100 ng/mL）消除Tie2通路交叉激活（验证交叉率<0.01%）
2025年技术升级：
新增血管通透性检测模块（基于内皮细胞阻抗分析）
标准品溯源至USP参考物质（RefStd-ANG22025）
微孔板采用仿生血管内皮涂层（批内CV降至1.8%）
二、试剂盒配置与关键参数
核心组件清单：
预包被96孔板（8×12可拆，充氩气包装）
重组兔ANG-2标准品（6梯度：0.1-100 ng/mL，含SEC-MALS鉴定证书）
检测系统：
钌标记链霉亲和素（4℃避光稳定18个月）
三丙胺电化学发光底物（动态范围扩展28倍）
专用组织保存液（含VEGF通路抑制剂）
性能指标：
参数 规格 生物学意义
检测范围 0.1-100 ng/mL 覆盖生理和病理浓度
灵敏度 0.05 ng/mL 可检测早期血管异常
精密度 板内CV<3%，板间CV<6% 符合AAALAC标准
特异性 与ANG-1交叉反应<0.1% 确保亚型特异性
三、实验操作标准化流程
样本处理规范：
组织样本：需液氮速冻后-80℃保存（避免蛋白降解）
稳定性数据：
4℃保存≤12小时（需立即添加抑制剂）
-80℃可保存6个月（避免反复冻融>3次）
特殊处理：
肿瘤组织需标注坏死区比例
糖尿病视网膜病变样本需避光操作
优化操作步骤：
超声处理：冰浴超声3×10秒（功率30%）
加样策略：采用之字形加样顺序
关键孵育：37℃恒温振荡（700rpm）75分钟
信号检测：电化学发光读数（积分时间400ms）
四、应用研究与科学价值
疾病模型关联：
肿瘤血管正常化：ANG-2/VEGF比值>2预示抗血管治疗敏感
脓毒症休克：血清>25 ng/mL与血管渗漏指数正相关（r=0.82）
糖尿病肾病：尿液>10 ng/mL预示微量白蛋白尿进展
2025年研究前沿：
发现ANG-2通过Integrin α5β1调控血管周细胞脱落
双特异性抗体（ANG-2/VEGF-A）治疗湿性AMD进入III期临床
空间转录组揭示伤口愈合中ANG-2时空表达模式
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”？
A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗？
A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？
A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。
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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：
稀释线性实验 (Linearity)：
操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。
预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test)：
操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。
预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。
回收实验 (Recovery Test)：
操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。
预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。
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