产品介绍:

产品名称 | 兔ECM1elisa试剂盒 | 英文名称 | Rabbit ECM1 ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A129955 |
实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法。捕获抗体包被在微孔板上,加入标准品或样本后,再加入HRP标记的检测抗体,形成抗体-ECM1-抗体复合物。加入底物TMB显色,颜色深浅与ECM1浓度正相关。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线,计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被抗体的酶标板:96孔或48孔配置。
标准品:浓度梯度为0、15.6、31.2、62.5、125、250、500 pg/mL。
样本稀释液:用于稀释待测样本。
检测抗体-HRP:辣根过氧化物酶标记的检测抗体。
洗涤缓冲液:用于洗涤反应孔。
底物A和B:显色底物,与HRP反应显色。
终止液:终止显色反应。
封板膜:用于封闭反应孔。
说明书:提供详细操作步骤。
检测范围与灵敏度
检测范围:通常为0-500 pg/mL。
灵敏度:最低检测浓度小于15.6 pg/mL。
样本类型及处理

血清:使用无菌管收集,室温自然凝固后离心取上清。
血浆:根据实验要求选择抗凝剂(EDTA、肝素钠或柠檬酸钠),离心取上清。
细胞培养上清:离心去除细胞碎片。
组织匀浆:组织加入生理盐水捣碎,离心取上清。
保存:短期保存于2-8℃,长期保存于-20℃或-70℃,避免反复冻融。
操作步骤
准备试剂和标准品:试剂盒平衡至室温,浓缩洗涤液溶解结晶。
设置孔板:空白孔、标准品孔和样本孔。
加样:加入标准品、样本和检测抗体,温育。
洗涤:彻底洗涤孔板,去除未结合成分。
显色:加入底物溶液,避光孵育。
终止:加入终止液,颜色变化停止。
测定:酶标仪测定吸光度,计算浓度。
性能特点

高灵敏度:可检测低浓度ECM12。
高特异性:不与其他类似结构蛋白交叉反应。
重复性好:板内和板间变异系数均小于15%。
稳定性高:试剂盒组分稳定,长期保存仍保持活性。
注意事项
样本处理:避免溶血、高血脂样本,标本需离心去除悬浮物。
试剂准备:试剂需恢复至室温,按说明书稀释和配制。
洗涤关键:洗涤不充分会导致OD值升高,需彻底洗涤。
显色控制:显色时间需根据实际情况调整,避免过度显色。
主要优点缺点

维度 优势 (Pros) 劣势 (Cons)
检测性能 灵敏度极高,特异性强,结果准确 可能存在交叉反应,易受干扰物影响
操作体验 流程标准化,无需昂贵设备,适合高通量检测 步骤多且繁琐,耗时较长,对操作技巧有要求
经济成本 适合大批量样本检测,长期看性价比尚可 单次试剂成本较高,且不同批次可能存在差异
应用范围 可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本 对样本质量(如是否溶血)敏感
公司正在出售的产品:

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试剂与样本准备阶段
温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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