兔GM-CSF/CSF2elisa试剂盒
产品简介:
英文名称 | Rabbit GM-CSF/CSF2 ELISA Kit | 产品类别 | Rabbit/兔Elisa试剂盒 |
货号 | A130031 | 规格 | 48T/96T |
检测原理
双抗体夹心法：预先包被抗GM-CSF抗体的酶标板中加入标准品和待测样本，孵育后洗去未结合成分。
结合检测抗体：加入生物素标记的检测抗体，与结合在包被抗体上的GM-CSF结合，再加入HRP标记的链霉亲和素。
显色测定：加入TMB底物液显色，酸终止反应后，用酶标仪在450nm波长测OD值，通过标准曲线计算样本中GM-CSF浓度。
试剂盒组成
预包被抗体的酶标板：96孔或48孔
HRP标记的链霉亲和素
生物素标记的检测抗体
标准品：不同浓度梯度
洗涤液：20倍浓缩液
底物液：TMB显色液
终止液：通常为硫酸溶液
其他辅助试剂：如样本稀释液等1245
检测步骤
准备试剂和样本：试剂盒平衡至室温，浓缩洗涤液稀释至工作浓度。
加样：设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，加入相应液体。
温育：37℃温育，使抗原抗体充分结合。
洗涤：甩去液体，用洗涤液洗涤，去除未结合成分。
加抗体和酶结合物：依次加入生物素标记抗体和HRP标记的链霉亲和素，温育后洗涤。
显色：加入底物液显色，避光温育。
终止：加入终止液终止反应。
测定：酶标仪测定OD值，通过标准曲线计算浓度。
注意事项
样本处理：确保样本清澈透明，避免溶血和反复冻融。
试剂保存：试剂盒储存在2-8℃，避免冻结，使用前检查试剂是否充分溶解。
实验操作：严格按照说明书操作，使用前混匀试剂，避免交叉污染。
底物液保存：底物液需避光保存，显色时间控制在30分钟内。
适用范围
科研用途：本试剂盒专用于科研实验，不适用于临床诊断。
样本类型：可检测兔血清、血浆、细胞培养上清液。
常见问题解答 (FAQ)
Q1: 为什么要做“复孔”？
A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。
Q2: 样本需要稀释吗？
A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。
Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？
A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。
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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：
稀释线性实验 (Linearity)：
操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。
预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。
干扰实验 (Interference Test)：
操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。
预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。
回收实验 (Recovery Test)：
操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。
预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。
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