产品介绍：
实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心法，用纯化的兔骨钙素抗体包被微孔板，依次加入标准品、待测样本及HRP标记的骨钙素抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。加入底物TMB显色，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中骨钙素的浓度。
产品名称 | 兔Osteocalcinelisa试剂盒 | 英文名称 | Rabbit Osteocalcin ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A130050 |
试剂盒组成
酶标板
酶标抗体工作液
标准品
样本稀释液
洗涤液
底物液
终止液
封板膜
其他辅助试剂
性能特点
灵敏度高：检测范围为60pg/ml-4500pg/ml，灵敏度高。
特异性强：可同时检测重组或天然的兔骨钙素，与其他细胞因子无交叉反应。
重复性好：批内变异系数小于9%，批间变异系数小于15%。
操作步骤
标准品稀释与加样：设标准品孔，按步骤稀释标准品并加入酶标板。
加样：设空白孔和待测样品孔，加入样本稀释液和待测样本。
加酶：每孔加入酶标试剂，空白孔除外。
温育：封板后37℃温育30分钟。
洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，重复洗涤5次。
显色：加入显色剂，37℃避光显色10分钟。
终止：每孔加终止液，终止反应。
测定：以空白孔调零，450nm波长下测定各孔吸光度。
注意事项
试剂盒需从冷藏环境中取出后平衡15-30分钟方可使用。
每次测定需同时做标准曲线，建议做复孔。
样品OD值大于标准品孔第一孔的OD值时，需稀释样本后测定。
底物需避光保存，严格按照说明书操作。
主要优点缺点
维度 优势 (Pros) 劣势 (Cons)
检测性能 灵敏度极高，特异性强，结果准确 可能存在交叉反应，易受干扰物影响
操作体验 流程标准化，无需昂贵设备，适合高通量检测 步骤多且繁琐，耗时较长，对操作技巧有要求
经济成本 适合大批量样本检测，长期看性价比尚可 单次试剂成本较高，且不同批次可能存在差异
应用范围 可检测血清、血浆、细胞上清等多种样本 对样本质量（如是否溶血）敏感
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试剂与样本准备阶段
温度平衡（最容易被忽视的点）
操作： 从冰箱取出的试剂盒（包括标准品、酶标试剂、样品等）必须在室温（18-25℃）下平衡 30 分钟。
后果： 冷试剂直接使用会导致孔内温差，产生冷凝水或非特异性背景，严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液： 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配： 酶标试剂和显色液（如 TMB）对光和热敏感，建议在使用前配制工作液，避免失效。
样本处理
避免溶血： 血清样本如果发生溶血（红细胞破裂），会释放过氧化物酶，导致假阳性或背景过高。
离心去杂质： 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心，去除沉淀和悬浮物，防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数： 如果样本浓度过高，超出标准曲线范围，必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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