三线镰刀菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 三线镰刀菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Fusarium tricinctum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3991 |
检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对三线镰刀菌基因组高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量分析，灵敏度可达数百拷贝/反应。
试剂组成
扩增预混液：含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系（50μL/管）
荧光PCR专用稀释液：1 mL（用于模板稀释）
三线镰刀菌特异性引物混合物：100μL（靶向保守序列）
阳性对照（1×10^8 拷贝/μL）：50μL（红盖管）
阴性对照：1管（白盖管）
操作步骤
样本制备
推荐使用配套基因组DNA提取试剂盒，按标准流程提取样本核酸。
反应体系配制
解冻试剂后离心30秒，按每反应孔加入18μL扩增预混液、0.8μL引物混合物及0.2μL稀释液。
分别加入2μL待测样本、阳性对照或阴性对照模板，总反应体积20μL。
PCR扩增
按以下程序运行：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
数据分析
使用仪器软件分析扩增曲线及Ct值，判定样本中三线镰刀菌核酸含量。
注意事项
避免反复冻融试剂，解冻后需充分混匀。
实验分区操作（样本制备区、模板添加区、扩增区），防止交叉污染。
阳性对照需与待测样本分装时段操作，建议最后处理。
性能参数
特异性：与常见镰刀菌属无交叉反应。
灵敏度：最低检测限为200拷贝/反应。
重复性：批内及批间变异系数≤5%。
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