隐袭腐霉染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 隐袭腐霉染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pythium insidiosum Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4019 |
产品特点
即开即用：用户仅需提供待测DNA模板，预混优化引物、染料及反应体系。
高灵敏度与特异性：引物针对隐袭腐霉高度保守区设计，避免交叉反应。
双重检测功能：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。
内置阳性对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，便于排除假阴性。
操作步骤
样本DNA提取
使用兼容的核酸提取试剂盒（如市售常见）纯化样本DNA，建议在样本制备区完成。
标准曲线制备（独立区域操作，避免污染）
标记离心管：编号7、6、5、4、3、2。
稀释液添加：每管加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液（需使用带芯枪头）。
梯度稀释：
7号管：加入5 μL试剂盒提供的阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL标准品。
依次稀释至2号管，获得10⁶~10²拷贝/μL系列浓度标准品。
保存：稀释后标准品置于冰上备用。
荧光定量PCR反应
反应体系配置：按20μL体系加入DNA模板、预混试剂及引物。
程序设置：
预变性：95℃, 2分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
数据分析：根据标准曲线计算样本中隐袭腐霉DNA拷贝数。
注意事项
分区操作：样本制备、试剂配制及扩增需严格分区，避免气溶胶污染。
质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板对照）及阳性对照。
重复性建议：定量检测时建议设置3次技术重复。
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