汉坦病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

汉坦病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量RT-PCR技术，专为汉坦病毒RNA检测设计，实现反转录（RT）与定量PCR（qPCR）单管一步完成。适用于临床样本、环境监测及科研领域，具备高灵敏度、高特异性和宽线性范围的特点。

检测原理

反转录阶段：耐热逆转录酶将病毒RNA高效转化为cDNA。

定量扩增阶段：HotStart Taq DNA聚合酶结合优化缓冲体系，通过荧光信号实时监测扩增产物。

特异性验证：熔解曲线分析确保扩增产物单一性，避免非特异性结合。

产品组分

| 组分编号 | 组分名称 | 规格（20 T） | 规格（200 T） |

| A | 2×荧光定量预混缓冲液 | 250 μL | 2×1.25 mL |

| B | 逆转录-聚合酶混合酶 | 20 μL | 200 μL |

| C | RNase-free H₂O | 250 μL | 2×1.25 mL |

| D | 阳性对照（无传染性DNA）| 50 μL | 50 μL |

核心性能

灵敏度：可检测低至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或单拷贝DNA。

线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

重复性：复孔间Ct值变异系数（CV）<2%。

稳定性：预混液在4℃下可保存24小时，-20℃长期保存。

操作步骤

样本制备：提取待测RNA，避免降解。

标准曲线配制：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立分区操作以防污染。

反应体系配制（20 μL/反应）：

2×预混缓冲液 10 μL

酶混合液 0.5 μL

引物（需自备）各0.4 μM

RNA模板 2 μL

补足RNase-free H₂O至20 μL。

程序设置：

反转录：50℃ 15分钟 → 95℃ 1分钟（酶激活）。

PCR扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环），熔解曲线分析（65℃~95℃）。

注意事项

防污染：使用带滤芯枪头，分区操作（样本制备、扩增、分析）。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板）及阳性对照。

适用范围：仅限科研使用，临床诊断需进一步验证。

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