猪霍乱沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

猪霍乱沙门氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，特异性检测猪霍乱沙门氏菌核酸，适用于科研领域的定性或定量分析。试剂盒包含预混反应液、引物、阳性对照（非传染性DNA片段）及配套稀释液，可完成50次20μL体系的检测。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

稳定性：组分在有效期内性能稳定，运输需使用干冰或冰袋。

技术参数

特异性：引物基于猪霍乱沙门氏菌高度保守区设计，无交叉反应。

灵敏度：定量检测线性范围达5个数量级（如10²~10⁷拷贝/μL）。

荧光参数：

游离染料吸收峰：471 nm；结合DNA后吸收峰：500 nm，发射峰：530 nm。

信号采集建议在复性或延伸阶段进行。

操作步骤

1. 样本准备

使用推荐方法提取样本DNA，避免降解或污染。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释（如10²~10⁷拷贝/μL），独立操作以防污染。

2. PCR反应体系配制

每20μL反应体系包含：预混液、引物、模板DNA及无菌水。

短暂离心混匀，避免气泡。

3. 上机检测

按仪器说明书设置程序，推荐参数：

预变性：95℃ 3分钟；

循环：95℃ 15秒→60℃ 30秒（采集荧光），共40循环。

结果判读

定量分析：以阳性对照Ct值绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35；

35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

实验安全：穿戴实验服、手套及口罩，分区操作（样本处理、试剂配制、扩增）。

质量控制：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且呈典型扩增曲线；

避免试剂反复冻融或光照。

局限性：

基因变异或提取效率差异可能导致假阴性；

结果需结合临床及其他检测方法综合判断。

免责声明

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。操作需符合实验室生物安全规范，废弃物按污染物处理。

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