技术原理与特点
染料法荧光定量PCR：采用SYBR Green荧光染料，实时监测DNA扩增，通过Ct值定量分析病原体载量。
即开即用：预混优化引物、缓冲液、酶等组分，用户仅需提供DNA模板。
高灵敏度与特异性：
引物针对Anaplasma marginale高度保守区（如外膜蛋白基因MSP4/MSP5或热休克蛋白基因groEL），避免与近缘种（如Anaplasma phagocytophilum）交叉反应。
检测限可达1~10拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。
质量控制：
提供阳性对照（灭活基因组DNA片段，无传染性），用于标准曲线制备及假阴性排除。
建议设置无模板阴性对照（NTC）以监控污染。
产品名称 | 边缘无浆体(无形体)染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Anaplasma marginale Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3933 |
试剂盒组分
| 组分 | 功能说明 |
| qPCR预混液 | 含热启动Taq酶、dNTPs、优化缓冲体系 |
| 特异性引物对 | 靶向Anaplasma marginale保守序列 |
| SYBR Green荧光染料 | 嵌入双链DNA释放荧光信号 |
| 阳性对照DNA | 定量标准（1×10⁸拷贝/μL） |
| 模板稀释液 | 用于标准品梯度稀释 |
操作流程
样本DNA提取：推荐磁珠法（如Qiagen Blood Kit）处理抗凝全血、组织或蜱虫样本，避免抑制剂干扰。
标准曲线制备：
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立分区操作以防污染。
PCR反应体系配制：
每20μL体系含预混液、引物、模板DNA（或标准品/阴性对照）。
扩增程序：
95℃预变性→（95℃变性→60℃退火/延伸）×40循环→熔解曲线分析。
结果判读：
阳性：Ct值＜35，扩增曲线呈S型；
可疑：Ct值35~40，需重复或测序验证；
阴性：无扩增曲线。
注意事项
防污染措施：严格分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区分离），使用带滤芯枪头。
季节性提示：冬季蜱虫活动减少，但隐性感染动物（如妊娠母畜）仍需筛查。
多重检测：可搭配其他病原体探针（如巴贝斯虫），需优化引物浓度。
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