猪传染性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪传染性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Porcine Transmissible Diarrhea Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4059 |
产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测猪传染性腹泻病毒（PEDV）核酸，适用于科研领域的定性或定量分析。试剂盒包含高特异性引物、荧光染料、阳性对照及反应体系所需组分，检测灵敏度高，线性范围达5个数量级，可兼容常见荧光定量PCR仪。
组分与保存条件
主要组分：
RT-PCR反应液（含荧光染料）
逆转录酶、DNA聚合酶
阳性对照（非传染性DNA片段）
阴性对照（无核酸酶水）
模板稀释液
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3次）。
检测原理
荧光染料特性：
游离状态下吸收峰471 nm，结合DNA后吸收峰500 nm，发射峰530 nm。
信号采集建议在复性或延伸阶段进行。
结果判读：
定量检测：通过标准曲线（Ct值-log浓度）计算待测样本拷贝数。
定性检测：
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型指数增长；
阴性：Ct值≥40；
可疑值（35<Ct<40）：需重复检测，复测Ct<40判为阳性。
操作步骤
样本准备：
使用推荐方法提取病毒RNA，避免交叉污染。
标准曲线制备（定量检测适用）：
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立分区操作。
PCR反应体系：
每20 μL反应体系包含：10 μL预混液、0.5 μL酶 mix、2 μL模板、7.5 μL无核酸酶水。
扩增程序：
逆转录：50℃ 15分钟；预变性：95℃ 2分钟；循环阶段：95℃ 10秒→60℃ 30秒（40循环）。
注意事项
实验安全：
穿戴实验服、口罩及手套，分区操作（样本处理、试剂配制、扩增）。
实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及仪器。
质量控制：
阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30，否则实验无效。
局限性：
病毒基因变异或提取效率差异可能导致假阴性，需结合临床或其他检测方法确认。
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