预期用途
本试剂盒用于检测鸭类样本(如肝脏组织、粪便、血清等)中鸭肝炎病毒2型的RNA，适用于DHV-2感染的快速诊断和流行病学调查。
产品名称 | 鸭肝炎病毒2型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Duck Hepatitis Virus Type 2 Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3959 |
检验原理
采用特异性引物和TaqMan探针，通过一步法RT-qPCR技术对DHV-2 RNA进行检测
探针5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团
PCR扩增时，Taq酶发挥5'→3'外切酶活性，使探针水解，释放荧光信号
通过实时监测荧光信号变化，实现对靶标RNA的定量检测
主要组成成分
| 组分 | 48T含量 | 96T含量 |
| DHV-2 RT-qPCR反应液 | 12×1.0mL | 24×1.0mL |
| DHV-2酶混合液 | 12×40μL | 24×40μL |
| DHV-2阳性对照 | 1×50μL | 1×50μL |
| DHV-2阴性对照 | 1×50μL | 1×50μL |
| RNase-free水 | 1×1mL | 1×1mL |
样本要求
样本类型：肝脏组织、粪便、血清等
采集后应尽快处理，或-70℃保存
避免反复冻融
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月
适用仪器
ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX96等常见荧光定量PCR仪
检验方法
RNA提取：使用商品化RNA提取试剂盒提取样本RNA
反应体系配制（20μL体系）：
RT-qPCR反应液 15μL
酶混合液 1μL
模板RNA 4μL
反应程序：
50℃ 30min (反转录)
95℃ 10min (预变性)
95℃ 15sec → 60℃ 1min，45个循环
结果判定
阈值设定：取3-15个循环的荧光信号标准差的10倍
阳性判定：Ct值≤35且有典型扩增曲线
阴性判定：无Ct值或Ct值>35
性能指标
灵敏度：可检测到10 copies/μL的DHV-2 RNA
特异性：不与DHV-1、DHV-3及其他常见鸭病原体交叉反应
重复性：Ct值变异系数(CV)≤5%
注意事项
实验分区操作，防止污染
试剂使用前充分融化并混匀
建议设置三个重复孔
废弃物应按生物安全要求处理
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