乳酸乳球菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 乳酸乳球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Lactococcus lactis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4074 |
产品描述
本试剂盒采用SYBR Green I染料法，专用于快速、高灵敏度检测 乳酸乳球菌（Lactococcus lactis） 的核酸。适用于食品发酵监控、益生菌鉴定及微生物研究等领域。
检测原理
特异性引物：针对乳酸乳球菌保守基因序列（如16S rRNA或ldh基因）设计。
SYBR Green I染料：与双链DNA结合后发出荧光信号，实时监测扩增进程。
定量分析：通过标准曲线计算样品中乳酸乳球菌的拷贝数或浓度。
组分列表
| 组分名称 | 规格（100T） | 储存条件 |
| 2× SYBR Green Master Mix | 1 mL×2 | -20℃避光 |
| L. lactis 引物混合液 | 200 μL | -20℃ |
| 阳性对照（基因组DNA） | 50 μL | -20℃ |
| 无核酸酶水 | 1 mL | 室温 |
实验步骤
1. 样本制备
提取待测样本DNA（推荐柱式法提取）。
2. PCR反应体系（50 μL）
| 组分 | 体积 |
| 2× SYBR Green Mix | 25 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| 模板DNA | 5 μL |
| 无核酸酶水 | 补至50 μL |
3. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 30 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 熔解曲线 | 60-95℃ | 梯度升温 | 1 |
数据分析
阈值设定：使用仪器软件自动分析Ct值。
标准曲线：以阳性对照梯度稀释后建立线性方程（R²≥0.99）。
熔解曲线：确认单一峰以排除非特异性扩增。
性能参数
灵敏度：最低检测限10 copies/μL
特异性：不与相近菌种（如Streptococcus）交叉反应
重复性：CV < 5%
注意事项
避免反复冻融试剂，分装后使用。
操作时穿戴防护装备，防止核酸污染。
熔解曲线异常可能提示引物二聚体或污染。
有效期与储存
有效期：12个月（-20℃避光保存）。
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