产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，专用于伊丽莎白巴尔通体（Bartonella spp.）的核酸定性及定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏度和特异性，可检测低至10^2拷贝/μL的靶标DNA，线性范围覆盖5个数量级（10^2–10^7拷贝/μL）。
产品名称 | 伊丽莎白巴尔通体染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Bartonella elizabethae Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4110 |
试剂盒组成
PCR反应预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）。
阳性对照：无传染性的DNA片段（1×10^8拷贝/μL），用于标准曲线制备及假阴性判定。
模板稀释液：用于标准品梯度稀释。
其他组分：DEPC-H2O或专用稀释液。
注：本试剂盒不含核酸提取试剂，需用户自行制备DNA模板。
操作步骤
标准曲线制备（样本制备区）
标记离心管：取6管，分别标记为7、6、5、4、3、2。
稀释阳性对照：
向每管加入45 μL模板稀释液（需使用带芯枪头）。
7号管中加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品。
依次梯度稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），每步更换枪头并充分震荡。
保存：稀释后标准品置于冰上备用，避免反复冻融。
PCR反应体系配置（反应配制区）
体系组成（20 μL/反应）：
预混液10 μL
引物混合液2 μL
模板DNA 2 μL（样本或标准品）
DEPC-H2O补足至20 μL。
分装：建议设置3复孔以提高准确性。
荧光定量PCR程序
循环条件：
预变性：95℃ 5分钟；
扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）；
熔解曲线分析（可选）：60–95℃逐步升温。
注意事项
分区操作：标准品稀释与样本处理需在独立区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板对照）及标准曲线（R²≥0.99）。
数据判读：定量结果需基于标准曲线计算；熔解曲线单峰表明扩增特异性。
性能参数
特异性：引物针对巴尔通体保守序列设计，无交叉反应。
灵敏度：最低检测限10^2拷贝/μL。
稳定性：-20℃保存有效期12个月，避免反复冻融。
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关键字： 啮齿动物血液样本、人皮肤病变组织;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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