文氏密螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

文氏密螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品简介

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于文氏密螺旋体（Treponema vincentii）的核酸定性或定量检测。适用于科研用途（不可用于临床诊断），通过特异性引物与荧光染料结合，实现对目标基因的高灵敏度扩增与实时监测。

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 | 保存条件 |

| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） | -20℃避光 |

| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） | 室温 |

| 试剂三 | 引物混合液 | 100 μL（白盖） | -20℃避光 |

| 试剂四 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） | -80℃长期保存 |

| —— | 使用手册 | 1份 | —— |

检测原理

标准品构建：将参照基因（如管家基因RPPH1）与文氏密螺旋体目的基因按1:1比例克隆至pMD18-T载体，形成标准品，经梯度稀释后绘制双标准曲线。

同步扩增：待测样本与标准品同步进行实时荧光定量PCR，通过Ct值计算目的基因与参照基因拷贝数比值，实现相对定量。

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA，避免交叉污染。

反应体系配制：

按比例混合PCR MagicMix、引物、模板DNA及超纯水。

阳性对照需最后加入，单独分区操作。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟；

扩增循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光），共40循环。

数据分析：

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，推算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且呈典型扩增曲线；

样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

注意事项

操作规范：

使用一次性耗材，分区操作（样本处理、试剂配制、加样分离）。

反应液避光保存，避免气泡，管盖需密封。

质量控制：

所有组分使用前需完全融化、混匀并短暂离心。

实验后工作台需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

生物安全：废弃物按《微生物生物医学实验室生物安全通则》处理。

性能参数

灵敏度：最低检测限为1×10²拷贝/μL。

特异性：引物经优化，避免交叉反应。

重复性：批内/批间变异系数≤5%。

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