肺孢子虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 肺孢子虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Pneumocystis spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4336 |
检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，针对肺孢子虫高度保守基因区域设计特异性引物。通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号，实现对目标核酸的定性和定量分析。
试剂组成
扩增液：50μL ×1管
反应液：950μL ×1管
阳性质控品（1×10^8拷贝/μL）：50μL ×1管
阴性质控品：50μL ×1管
说明书：1份
注：
不同批号组分不可混用。
部分提供预混试剂（如PCR MagicMix 3.0）及引物混合液（详见具体包装）。
储存及有效期
储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次）。
有效期：12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 系列（如7500、StepOnePlus）
Roche LightCycler
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler
样本要求
样本类型：胃液分泌物、呼吸道样本或培养物（需符合《临床微生物样本采集规范》）。
保存与运输：
短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）。
运输需使用2~8℃冰袋，禁止反复冻融。
操作步骤
1. 样本处理
DNA提取：使用无核酸酶污染的提取试剂盒，避免交叉污染。
2. 阳性对照稀释（以10^2-10^7拷贝/μL梯度为例）
按10倍梯度稀释阳性质控品，独立操作以防污染。
3. PCR反应体系
每反应体系20μL，含模板DNA、扩增液、反应液及引物混合液（具体比例参考说明书）。
4. 扩增程序
预变性：95℃ 5分钟 → 扩增循环（95℃ 10秒，60℃ 30秒，40循环） → 熔解曲线分析。
结果判读
定性：Ct值≤35且熔解曲线峰值单一判为阳性。
定量：通过标准曲线计算拷贝数（线性范围10^2-10^7拷贝/μL）。
注意事项
实验分区操作（样本处理区、PCR准备区、扩增区）。
使用滤芯吸头及无核酸酶耗材。
阳性质控品为DNA片段，非活体病原体。
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