猪疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检测原理

通过特异性引物与荧光染料结合靶标DNA，实时监测扩增过程中荧光信号变化，定量分析病毒拷贝数。

产品组成

荧光定量PCR预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（激发波长471 nm，发射波长530 nm）。

阳性对照：已知浓度的猪疱疹病毒DNA片段（需独立稀释，避免污染）。

阴性对照：无核酸酶水。

ROX校正染料（根据机型需求提供）。

专用模板稀释液。

操作步骤

1. 样本处理

待测样本需提取DNA，建议使用商品化核酸提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（以10^2-10^7拷贝/μL梯度为例）

标记离心管（7-2号），每管加入45 μL稀释液。

7号管加入5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL），震荡混匀得10^7拷贝/μL，依次稀释至10^2拷贝/μL。

3. PCR反应体系

每反应20 μL：预混液10 μL、引物探针混合液2 μL、模板DNA 2 μL、ROX（按机型添加）、补足无核酸酶水。

4. 上机程序

预变性：95℃ 3分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

数据分析

定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性判定：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线；

阳性：Ct≤35且曲线呈指数增长；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作需在无菌环境下进行，穿戴实验服、手套及口罩。

避免试剂交叉污染，稀释阳性对照时使用带滤芯枪头。

不同机型需调整ROX用量，具体参考仪器说明书。

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