检测原理
通过特异性引物与荧光染料结合靶标DNA，实时监测扩增过程中荧光信号变化，定量分析病毒拷贝数。
产品名称 | 猪疱疹病毒通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Porcine Herpesvirus Universal Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4207 |
产品组成
荧光定量PCR预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（激发波长471 nm，发射波长530 nm）。
阳性对照：已知浓度的猪疱疹病毒DNA片段（需独立稀释，避免污染）。
阴性对照：无核酸酶水。
ROX校正染料（根据机型需求提供）。
专用模板稀释液。
操作步骤
1. 样本处理
待测样本需提取DNA，建议使用商品化核酸提取试剂盒。
2. 阳性对照稀释（以10^2-10^7拷贝/μL梯度为例）
标记离心管（7-2号），每管加入45 μL稀释液。
7号管加入5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL），震荡混匀得10^7拷贝/μL，依次稀释至10^2拷贝/μL。
3. PCR反应体系
每反应20 μL：预混液10 μL、引物探针混合液2 μL、模板DNA 2 μL、ROX（按机型添加）、补足无核酸酶水。
4. 上机程序
预变性：95℃ 3分钟；
循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。
数据分析
定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性判定：
阴性：Ct≥40或无扩增曲线；
阳性：Ct≤35且曲线呈指数增长；
可疑（35<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
操作需在无菌环境下进行，穿戴实验服、手套及口罩。
避免试剂交叉污染，稀释阳性对照时使用带滤芯枪头。
不同机型需调整ROX用量，具体参考仪器说明书。
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