产品基本信息
规格：50次反应（20μL体系/次）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；运输需低温（冰袋或干冰）。
用途：科研专用，适用于HERV-W RNA的定性或定量检测。
产品名称 | 人类内源性逆转录病毒W家族探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Human Endogenous Retrovirus W Family Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4831 |
产品特点
即开即用：预混优化引物、探针及反应缓冲液，仅需提供样品RNA模板。
高灵敏度与特异性：引物针对HERV-W保守区设计，避免与其他病毒交叉反应。
内控设计：含阳性对照（10^7拷贝/μL DNA片段），区分假阴性；阴性对照需Ct≥40。
宽动态范围：定量检测线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
安全合规：阳性对照为非传染性DNA片段，符合生物安全规范。
操作流程
1. 样本准备
样本类型：血液（EDTA抗凝）、粪便、病灶渗出物等。
RNA提取：推荐使用兼容的RNA提取试剂盒，避免DNA污染。
保存要求：提取后RNA短期存于-20℃，长期存于-70℃（≤6个月）。
2. 标准曲线制备（定量检测）
使用试剂盒提供的阳性对照，按10倍梯度稀释（10^7–10^1拷贝/μL），独立操作以防污染。
标记离心管（6管），每管加45μL稀释液，依次加入5μL上一浓度标准品，涡旋混匀。
3. qRT-PCR反应设置
体系：20μL/反应，含缓冲液、酶混合液、引物探针干粉及模板RNA。
程序：
逆转录：50℃ 10分钟
预变性：95℃ 10分钟
扩增（40循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）
4. 数据分析
定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；临界值（39–40）需复测。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。
质量控制：每次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照。
仪器校准：确保荧光定量PCR仪通道参数（FAM/NFO）匹配。
局限性：
基因变异可能导致假阴性；
样本降解或提取效率低影响结果；
严禁反复冻融样本。
包装清单
探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）
酶混合液（50μL）
荧光PCR模板稀释液（1mL）
引物-探针干粉（50T）
阳性对照（50μL，10^7拷贝/μL）
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关键字： 人类内源性逆转录病毒W家族;染料法荧光定量;PCR试剂盒;