受体探针法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用TaqMan探针法，基于实时荧光定量PCR技术，通过特异性荧光探针与靶序列结合，实现高灵敏度、高特异性的核酸定量检测。试剂盒包含优化的预混体系、热启动Taq DNA聚合酶及ROX内参染料，适用于多种荧光定量PCR仪，广泛应用于科研领域的基因表达分析、病原体检测及等位基因分型。

产品组成

2× Real PCR Mix-TaqMan

含热启动Taq DNA聚合酶、MgCl₂（3.5 mM）、dNTPs、缓冲液及稳定剂。

规格：500×20 μL或2000×20 μL反应体系。

ROX Reference Dye

用于校正孔间信号误差，适配ABI、Stratagene等机型。

DNase-Free ddH₂O

超纯水，确保无核酸酶污染。

技术参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的模板。

线性范围：5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

特异性：探针与引物经Blast验证，避免非特异性结合。

扩增效率：≥90%（斜率-3.1至-3.6）。

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照（10^7拷贝/μL）按10倍梯度稀释至10^1–10^6拷贝/μL，冰上保存备用。

2. 反应体系配制（20 μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| 2× Real PCR Mix | 10 |

| 正向/反向引物（10 μM） | 各0.5 |

| TaqMan探针（10 μM） | 0.5 |

| 模板DNA | 2–5 |

| ROX染料（按仪器要求） | 0.5 |

| ddH₂O | 补至20 |

3. PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min |

| 循环（40×） | 95℃ | 15 sec |

| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min |

注意事项

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融；频繁使用时可在4℃保存≤10天。

污染控制：

分设试剂配制区、样本处理区及扩增区。

使用带滤芯枪头及一次性手套。

结果判读：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39；样本Ct值在标准曲线范围内定量，否则需重复检测。

常见问题

无扩增信号：

检查Taq酶活性（避免反复冻融或过期）。

优化Mg²⁺浓度（以0.5 mM梯度调整）。

纯化模板以去除抑制剂。

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