天花病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

天花病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术，通过嵌入DNA双链的荧光染料（如SYBR Green）实时监测扩增产物。基于天花病毒保守序列设计的特异性引物，确保与相关病毒无交叉反应，灵敏度可达几百拷贝/反应。

试剂盒组成

核心组分：

特异性引物：针对天花病毒保守区域设计。

预混液：含热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。

阳性对照：含天花病毒靶序列的标准品（用于标准曲线建立）。

辅助工具：需自备移液枪（20μL、50μL、100μL、1000μL及排枪）、无核酸酶枪头及离心管。

实验步骤

样本准备：

实验前1小时将试剂盒从-20℃取出，平衡至室温。

待测样本需提取核酸（用户自行提供）。

PCR反应体系配制：

按20μL体系混合预混液、引物、模板DNA及无核酸酶水。

避免气泡产生，移液速度需缓慢。

扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟。

循环阶段（40-45轮）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）。

数据分析：

根据阳性对照的标准曲线，计算待测样本的目的基因拷贝数（相对定量）。

注意事项

操作规范：

移液枪误差需控制在2%以内，建议定期校准。

不同液体需更换枪头，避免交叉污染。

试剂保存：

底物需避光保存，反应完成后立即检测荧光信号。

质量控制：

每批次实验需包含阴性对照（无模板对照）及阳性对照。

性能参数

特异性：与猴痘病毒、牛痘病毒等无交叉反应。

灵敏度：最低检测限为100拷贝/反应。

重复性：批内变异系数（CV）≤5%。

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